莱茵衣藻LZTFL1蛋白的多克隆抗体制备及应用

发布时间：2018-01-03 22:07

  本文关键词：莱茵衣藻LZTFL1蛋白的多克隆抗体制备及应用　出处：《中国生物工程杂志》2017年11期 　论文类型：期刊论文

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【摘要】：目的:亮氨酸拉链转录因子1(LZTFL1)是一种与纤毛信号转导相关的蛋白质,关于其如何在信号转导中发挥作用以及作用机制目前尚不清楚。莱茵衣藻(Chlamydomonas reinhardtii)是研究纤毛信号传导的模式生物,而目前对莱茵衣藻LZTFL1蛋白的研究甚少,尚未有相应的检测抗体,因此制备LZTFL1多克隆抗体用于后续实验研究。方法:采用RT-PCR技术从C.reinhardtii CC125中提取总RNA,扩增981bp的目的基因Lztfl1,插入到p ET-28a(+)原核表达载体,成功构建p ET-28a(+)-Lztfl1重组质粒,转入E.coli BL21(DE3)经IPTG诱导后成功表达6×His-LZTFL1融合蛋白,融合蛋白经亲和纯化后免疫新西兰大白兔制备多克隆抗体,最后采用间接ELISA法测得抗血清效价达到1∶512 000,经Western blot对C.reinhardtii CC125检测具有较高特异性。结果:首次实现了莱茵衣藻LZTFL1蛋白的原核表达,制备出一支兔抗莱茵衣藻LZTFL1蛋白的多克隆抗体,为后续研究LZTFL1蛋白在莱茵衣藻中的结构功能及在纤毛信号转导中的相互作用奠定了基础。
[Abstract]:Objective : The leucine zipper transcription factor 1 ( LZTFL1 ) is a kind of protein related to ciliary signal transduction . It is not clear how it plays a role in signal transduction and the mechanism of action is not clear .

【作者单位】： 天津科技大学大健康生物技术研究所天津市大健康生物技术国际联合研究中心天津科技大学食品工程与生物技术学院;
【基金】：国际遗传工程与生物技术中心联合研究资助项目(CRP/CHN15-01)
【分类号】：R392
【正文快照】： 莱茵衣藻(C.reinhardtii)是一种结构简单的单细胞真核藻类,是目前国内外研究纤毛结构、组装及功能的主要模式生物之一[1]。纤毛根据其运动状态分为运动纤毛和原生纤毛,运动纤毛是由“9+2”型微管蛋白骨架形成的从细胞基体部位伸出的较长细胞突起,原生纤毛由“9+0”型微管蛋白

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本文编号：1375784