小鼠STING基因启动子的克隆鉴定及功能初步分析

发布时间：2018-01-05 20:00

  本文关键词：小鼠STING基因启动子的克隆鉴定及功能初步分析　出处：《南京医科大学学报(自然科学版)》2016年07期 　论文类型：期刊论文

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【摘要】：目的 :克隆小鼠干扰素基因刺激因子(STING)基因启动子,并对其启动子活性和转录调控机制进行初步探讨。方法 :利用PCR方法扩增小鼠STING基因5′上游1 005 bp(-927~+77)的片段,亚克隆至p GL3-basic质粒,然后通过步移缺失构建不同缺失片段的重组质粒。双荧光素酶报告活性分析检测重组质粒在NIH3T3中的活性,并利用生物信息学方法预测转录因子结合位点。结果:经酶切、测序鉴定,成功构建了小鼠STING启动子荧光素酶报告基因重组质粒。与p GL3-basic质粒相比,STING启动子重组质粒的相对荧光素酶活性增加(P0.05)。通过生物信息学软件预测小鼠STING启动子区域(-177~-48)可能含有GATA、IK2、MZF1、SP1/SP3、STAT等转录因子结合位点。结论:成功构建小鼠STING不同缺失片段的启动子荧光素酶报告基因重组质粒。通过活性比较,推测小鼠STING的核心启动子区位于-177~+77区域,其中可能含有多个潜在的转录因子结合序列。
[Abstract]:Objective: to clone mouse interferon gene stimulating factor (STING) gene promoter and its promoter activity and transcriptional regulation mechanisms. Methods: using PCR method to amplify mouse STING gene 5 'upstream 1005 BP (-927~+77) was cloned into P GL3-basic plasmid, then step deletion constructs different deletion the recombinant plasmid. The recombinant plasmid in NIH3T3 activity detection analysis of dual luciferase activity, and the use of bioinformatics to predict transcription factor binding sites methodology. Results: identification by enzyme digestion, sequencing, successfully constructed the mouse STING promoter luciferase reporter plasmids. Compared with the P GL3-basic plasmid, the relative luciferase activity increased the STING promoter (P0.05). The recombinant plasmid was predicted by bioinformatics software in the promoter region of STING (-177~-48) may contain GATA, IK2, MZF1, SP1/SP3, STAT Transcription factor binding sites. Conclusion: the recombinant plasmid gene promoter luciferase reporter construct mouse STING different deletion fragments. The activity of STING in mice, speculated that the core promoter region in the -177~+77 region, which may contain several potential transcription factor binding sequences.

【作者单位】： 南京医科大学第一附属医院儿科;南京医科大学第一附属医院检验医学部;
【基金】：国家自然科学基金青年项目(81302531) 江苏省自然科学基金青年基金项目(BK20131018)
【分类号】：R392
【正文快照】： 固有免疫又称天然免疫,对于快速识别病原体感染,产生Ⅰ型干扰素(interferon,IFN)以及其他相关细胞分子,建立有效的宿主防御机制非常重要[1]。病原体入侵机体后,病毒核酸、细菌表面的复合物(如脂多糖、鞭毛蛋白)、ds RNA/RNA等作为保守的病原相关分子模式(pathogen associated

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本文编号：1384592