一株特异性识别B7-H3杂交瘤单克隆抗体Y4F11的分析和鉴定

发布时间：2018-01-07 05:49

本文关键词：一株特异性识别B7-H3杂交瘤单克隆抗体Y4F11的分析和鉴定　出处：《细胞与分子免疫学杂志》2016年10期 　论文类型：期刊论文

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【摘要】：目的研制小鼠抗人恶性胸水细胞表面分子的单克隆抗体(m Ab),并对其中Y4F11识别的抗原进行鉴定和验证。方法以胸水细胞为免疫原,常规免疫BALB/c小鼠、采用杂交瘤技术进行细胞融合和筛选阳性杂交瘤克隆;选取Y4F11为实验对象,采用流式细胞术分析其在初始和活化免疫细胞(T细胞、B细胞、NK细胞和单核细胞)上的结合情况;通过免疫共沉淀法获得与Y4F11特异性结合的条带、割胶、蛋白质谱测序后拼接出肽段,并进行BLAST分析比对;采用Western blot法、Dot-blot法及流式细胞术验证Y4F11与B7同源物3(B7-H3)的抗体抗原关系。结果获得78株能持续分泌识别恶性胸水细胞表面表达分子的抗体的杂交瘤细胞株,其中Y4F11与胸水细胞结合最高;Y4F11特异识别的条带相对分子质量(Mr)大小约为50 000,质谱结果经BLAST比对为B7-H3分子;继而的结合实验显示,Y4F11可以与B7-H3的转基因细胞结合,也可以与B7-H3融合蛋白有效地结合,B7-H3在免疫细胞表面表达的模式与Y4F11抗体在这些细胞上的结合一致,表明Y4F11识别的抗原分子为B7-H3。结论成功获得1株持续表达B7-H3 m Ab的杂交瘤细胞株Y4F11,为进一步研究分析B7-H3的生物学功能提供了物质基础。
[Abstract]:Objective To develop a monoclonal antibody ( m Ab ) of mouse anti - human malignant pleural effusion cell surface molecule , and to identify and verify the antigen recognized by Y4F11 .

【作者单位】：苏州大学基础医学与生物科学学院;苏州大学附属第一医院江苏省临床免疫研究所;江苏省干细胞与生物医用材料重点实验室;
【基金】：国家自然科学基金(31170834)
【分类号】：R392
【正文快照】： B7同源物3(B7 homolog3,B7-H3)是2001年Chapoval等[1]在人树突状细胞(dendritic cells,DC)的c DNA文库中首先发现的,人B7-H3分子有2种不同剪切体:B7-H3(2Ig B7-H3)和B7-H3b(4Ig B7-H3)。B7-H3b胞外段由Ig V1-Ig C1-Ig V2-Ig C2四个免疫球蛋白结构域组成,故又称为4Ig B7-H3,而

【参考文献】