LOX-1在C反应蛋白诱导人脐静脉内皮细胞组织因子表达中的作用

发布时间：2018-01-10 12:09

  本文关键词：LOX-1在C反应蛋白诱导人脐静脉内皮细胞组织因子表达中的作用　出处：《重庆医科大学》2012年硕士论文　论文类型：学位论文

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【摘要】：目的：目前C反应蛋白（CRP）被认为是一种独立、强烈的心血管疾病危险因素，，C反应蛋白能上调血管内皮细胞组织因子（TF）基因的表达。我们研究凝集素样氧化型低密度脂蛋白受体-1（LOX-1）在C反应蛋白诱导人脐静脉内皮细胞(HUVECs)组织因子表达中的作用，以探讨CRP在动脉血栓形成中可能的作用的。 方法：构建人重组质粒pTracer CMV2-CRP并将其转染HUVECs细胞,RT-PCR、Western blot法鉴定CRP在HUVECs中转录水平及蛋白水平的表达。再用质粒pTracer CMV2-CRP转染HUVECs细胞,分正常对照组、空质粒GFP组和CRP-GFP组（n=3），RT-PCR检测LOX-1、TF的mRNA表达，Western blot检测各组LOX-1、TF、P-ERK1/2、T-ERK1/2、P-JNK、T-JNK蛋白表达。CRP-GFP组分别加LOX-1阻断剂、ERK1/2阻断剂（U0126）、JNK阻断剂（SP600125），Western blot检测TF蛋白. 结果：在CRP质粒转染的HUVEC细胞中发现绿色荧光蛋白及检测到CRP的mRNA和蛋白表达。用表达人CRP的质粒转染HUVECs显著增加LOX-1mRNA和蛋白表达（0.70±0.03vs0.24±0.01,0.6616±0.0200vs0.2558±0.0400, P＜0.05）、TF的mRNA和蛋白表达(0.442±0.040vs0.146±0.030，0.7274±0.0200vs0.2174±0.0200,P＜0.05)。CRP激活了ERK1/2MAPK,未激活JNK MAPK。CRP上调TF表达被ERK1/2阻断剂而非JNK阻断剂阻断.抗LOX-1的中和抗体显著减少CRP诱导的TFmRNA和蛋白表达（0.264±0.030vs0.442±0.040,0.3244±0.0400vs0.7274±0.0200,P＜0.05）。 结论：构建的重组质粒成功转染HUVEC细胞，CRP基因在CRP质粒转染的HUVEC细胞中成功转录和翻译。CRP诱导HUVECs细胞LOX-1表达上调，并通过LOX-1受体这一新途径上调TF表达，且CRP通过ERK1/2MAPK信号途径非JNK MAPK途径上调了HUVEC细胞TF的表达。
[Abstract]:Objective : To investigate the role of lectin - like oxidized low - density lipoprotein receptor - 1 ( LOX - 1 ) in the expression of tissue factor ( TF ) in human umbilical vein endothelial cells induced by C - reactive protein . Methods : Human recombinant plasmid pTracer CMV2 - CRP was constructed . The expression of transcription level and protein level was determined by RT - PCR and Western blot . Results : The expression of mRNA and protein was detected in HUVEC transfected with CRP plasmid . The expression of LOX - 1mRNA and protein was significantly increased ( 0.70 卤 0.03 vs 0.24 卤 0.01 , 0.6616 卤 0.0200 vs 0.2174 卤 0.0200 , P < 0.05 ) . The expression of TF mRNA and protein was significantly decreased by the neutralizing antibody against LOX - 1 ( 0.264 卤 0.030 vs 0.442 卤 0.040 , 0.3244 卤 0.0400vs0.7274 卤 0.0200 , P < 0.05 ) . Conclusion : The recombinant plasmid constructed successfully transfected HUVEC cells and CRP gene was successfully transcribed and translated into HUVEC cells transfected with CRP plasmid . The expression of LOX - 1 in HUVEC induced by CRP was up - regulated and the expression of TF was up - regulated by the new pathway of LOX - 1 receptor .

【学位授予单位】：重庆医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2012
【分类号】：R363

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本文编号：1405202