人脂肪干细胞诱导分化为角膜内皮样细胞的研究

发布时间：2018-01-14 03:30

  本文关键词：人脂肪干细胞诱导分化为角膜内皮样细胞的研究　出处：《大连医科大学》2012年硕士论文　论文类型：学位论文

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【摘要】：目的：体外培养人脂肪间充质干细胞和兔角膜内皮细胞，通过将培养的人脂肪间充质干细胞和兔角膜内皮细胞共培养，探讨人脂肪间充质干细胞体外诱导分化为角膜内皮样细胞的可行性，为组织工程角膜内皮细胞重建寻求一种新的种子细胞来源，为组织工程角膜内皮细胞重建奠定基础。 方法：（1）分别采用酶消化法和组织块法提取人脂肪间充质干细胞和兔角膜内皮细胞，用倒置显微镜、流式细胞仪、免疫组化法分别观察鉴定两种细胞。（2）Transwell共培养，取原代兔角膜内皮细胞细胞悬浮液（接种密度1×10~5/ml）（0.4μm孔径）接种于Transwell小室中，将第3代人脂肪干细胞（接种密度为1×10~5/ml）接种于Transwell小室下培养板中，放入37℃、饱和度5%的CO2的孵育箱中培养,隔日换液，共培养10天。用免疫组化染色法鉴定被诱导人脂肪间充质干细胞的水通道蛋白的表达。 结果：（1）体外培养的人脂肪干细胞大部分细胞伸展为梭形，，部分区域呈集落样生长，呈典型的成纤维细胞样，局部排列具有一定的方向性，第3代人脂肪间充质干细胞表面抗原测定结果显示人脂肪间充质干细胞表面抗原对CD44阳性率93.7%，CD34阳性率1.6%。（2）体外培养的兔角膜内皮细胞形态多为六边形或多边形，片状生长。免疫组化染色显示神经特异烯醇化酶表达阳性。（3）经体外transwell共培养诱导后的人脂肪间充质干细胞形态变化不明显，可见部分细胞体积变大，折光性增强，部分hADSCs皱缩凋亡，生长速度减慢。免疫组化染色显示水通道蛋白表达阳性。 结论：（1）人脂肪间充质干细胞和兔角膜内皮细胞能够在体外成功培养并传代。（2）体外培养的人脂肪干细胞在适宜的条件下具有向角膜内皮细胞分化的潜能。
[Abstract]:Objective: to culture human adipose mesenchymal stem cells and rabbit corneal endothelial cells in vitro and co-culture human adipose mesenchymal stem cells and rabbit corneal endothelial cells. To explore the feasibility of inducing human adipose mesenchymal stem cells to differentiate into corneal endothelioid cells in vitro, and to seek a new seed cell source for tissue engineered corneal endothelial cell reconstruction. To lay the foundation for tissue engineering corneal endothelial cell reconstruction. Methods Human adipose mesenchymal stem cells and rabbit corneal endothelial cells were extracted by enzyme digestion method and tissue mass method, respectively. Flow cytometry and inverted microscope were used to extract human adipose mesenchymal stem cells and rabbit corneal endothelial cells. Immunohistochemical method was used to observe and identify the co-culture of two kinds of cells. The primary rabbit corneal endothelial cell suspension (seeding density 1 脳 10 ~ (5) / ml ~ (4) 渭 m) was inoculated into the Transwell chamber. The third generation of human adipose stem cells (inoculation density 1 脳 10 ~ (5) / ml) was cultured in the incubator of CO2 (37 鈩

本文编号：1421848