Ⅰ、Ⅱ型胶原蛋白对人软骨细胞生物学特性的影响

发布时间：2018-01-14 13:22

  本文关键词：Ⅰ、Ⅱ型胶原蛋白对人软骨细胞生物学特性的影响　出处：《川北医学院》2012年硕士论文　论文类型：学位论文

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【摘要】：目的：通过观察三种培养板中人软骨细胞的生物学特性，了解Ⅰ、Ⅱ型胶原蛋白对体外培养的人软骨细胞的生物学特性的影响。 方法：软骨组织标本来自于川北医学院附属医院骨科，因股骨颈骨折行全髋置换术的患者。在实验室经过Ⅱ型胶原酶一步消化法处理关节软骨后进行体外单层培养获得大量软骨细胞，经过3个月软骨细胞培养传代至第7代，记为P0—P7，相差光镜下观察细胞形态，选择第三代软骨细胞进行研究。细胞计数后分别加入普通培养板（普通板），Ⅰ型胶原蛋白包被的培养板（Ⅰ型）、Ⅱ型胶原蛋白包被培养板（Ⅱ型）继续培养。通过评价细胞活性、倍增时间、相差光镜观察细胞形态来分析细胞培养结果，通过ELISA技术、甲苯胺蓝染色来鉴定软骨细胞表型，PCR技术、糖胺多糖定量检测来了解软骨细胞在三种培养板中分化增殖能力。 结果：(1)收集20例符合标准的关节软骨标本，选择培养后细胞形态正常、活性强的10组软骨细胞进行试验。（2）从倒置相差显微镜下观察细胞形态，刚消化好未贴壁软骨细胞呈圆形，贴壁后细胞大小变化不大呈多角形。传代后，细胞逐渐伸长，变大，随着传代数增加，细胞逐渐呈长梭形，，类似成纤维细胞，前三代软骨细胞具有明显增殖活性，细胞形态相似，从第4代开始逐渐变为长梭形，到第7代，软骨细胞完成变为成纤维细胞。（3）将第3代软骨细胞分别加入Ⅰ型、Ⅱ型和普通板后继续培养7天后观察，发现Ⅱ型中软骨细胞数量最多，且增殖速度为Ⅰ型的2倍，普通板的5倍，该结果提示其增殖速度较快。检测三种不同培养板中软骨细胞分泌Ⅰ、Ⅱ型胶原蛋白的量，发现Ⅱ型中软骨细胞分泌Ⅰ型胶原蛋白最少，且与普通板检测结果差异有统计学意义（P0.01），而与Ⅰ型板检测结果差异无统计学意义；Ⅱ型板中软骨细胞分泌Ⅱ型胶原蛋白量最多，与其他两种培养板检测结果的差异均具有统计学意义（P0.01）；甲苯胺蓝染色及DMMB比色法定量检测软骨细胞分泌糖胺多糖的量，发现Ⅱ型板上软骨细胞分泌糖胺多糖最多，与Ⅰ型板、普通板检测结果差异具有统计学意义（P0.01）。上述结果均提示Ⅱ型板中软骨细胞分裂增殖能力较强。 结论： 1本研究发现使用DMEM配置胶原酶，采用Ⅱ型胶原酶一步消化法并且分次收集软骨细胞，可以减少消化酶对软骨细胞的毒性，保持细胞活力。 2.胶原蛋白和软骨细胞有交互作用，胶原蛋白包被的培养板应用于原代软骨细胞体外培养时能使细胞尽早贴壁，减少悬浮死细胞量。 3.胶原蛋白包被的培养板培养软骨细胞优于普通培养板，其中Ⅱ型胶原蛋白包被的培养板在培养软骨细胞时更能维持细胞形态，延长去分化现象出现的时间，更有使细胞再分化的能力。
[Abstract]:Aim: to observe the biological characteristics of human chondrocytes in three culture plates and to investigate the effects of collagen 鈪

本文编号：1423756