冷应激对大鼠血管平滑肌细胞钙通道表达的影响

发布时间：2018-01-16 16:09

  本文关键词：冷应激对大鼠血管平滑肌细胞钙通道表达的影响　出处：《南昌大学》2012年硕士论文　论文类型：学位论文

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【摘要】：目的： 观察大鼠及体外培养的大鼠血管平滑肌细胞(VSMC)暴露于低温条件并持续不同时间后，血压及血管平滑肌细胞上钙通道α1C亚基表达的变化。 方法： ①动物分组及冷应激高血压模型的建立：选用健康成年SD大鼠24只，体重150-180克，完全随机分为对照组和实验组，实验组又分为2、4、6周组，每组6只。对照组大鼠在室温下（25±1℃）饲养；实验组大鼠每天置于（4±1）℃、相对湿度为70%的气候箱中4小时，2、4、6周组大鼠接受寒冷刺激时间分别为持续2、4、6周；血压测量：于实验两周前开始测量血压，每周3次，每次在大鼠安静状态测量，读数5次，取其平均值；大鼠主动脉VSMC的分离及应用半定量逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）检测主动脉钙离子通道α1C亚基的表达：腹腔麻醉后将SD大鼠处死，取出胸主动脉，游离出血管中膜，剪成小块，在RNA提取试剂Trizol中充分匀浆。根据试剂盒的说明进行逆转录聚合酶链反应，半定量检测主动脉钙离子通道α1C亚基的表达。 ②贴壁法培养大鼠主动脉VSMC。将细胞暴露低温(4±1)℃，分别暴露2、4、6小时。应用流式检测各组VSMC内钙离子浓度及半定量逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）检测各组VSMC钙离子通道α1C亚基mRNA的表达。 结果： 1.大鼠的收缩压变化：在冷应激环境中大鼠血压升高。实验组大鼠血压从第2周开始升高，2周冷应激大鼠模型血压为（102.8±2.25）mmHg，，对照组大鼠血压为（89.16±3.73）mmHg，两组相比有显著统计学差异（p0.05）；第4、6周冷应激大鼠模型血压分别为（114.53±4.21）mmHg、(121.94±3.03)mmHg，与对照组相比有显著统计学差异（p0.01）。 2.寒冷暴露组血管平滑肌钙离子通道α1C亚基mRNA水平变化：与对照组相比，暴露组大鼠主动脉血管平滑肌钙离子通道α1CmRNA的表达从第2周开始增加，到第6周达到最高，对照组钙离子通道α1C亚基mRNA的相对表达量为（0.13±0.02），2、4、6周冷应激大鼠模型钙离子通道α1C亚基mRNA的相对表达量分别为（0.21±0.02）、（0.33±0.05）、（0.57±0.08），与对照组相比有显著统计学差异（p0.01）。 3.钙通道α1C亚基mRNA相对表达量与血压的有显著相关性：大鼠主动脉血管平滑肌钙离子通道α1CmRNA相对表达量和寒冷暴露后大鼠血压变化运用SPSS13.0软件进行相关分析（Pearson分析），相关系数为0.86（p0.01）。 4.倒置相差显微镜下观察VSMC为梭形、长梭形，排列成放射状，呈典型“谷”与“峰”生长现象，阳性率在95%以上。 5.寒冷暴露的主动脉VSMC钙离子浓度的变化：与对照组相比，冷刺激大鼠主动脉血管平滑肌细胞内钙离子浓度增高，且具有统计学差异（对照组：42.68±8.92nmol/L，寒冷暴露2小时组86.81±9.87nmol/L，寒冷暴露4小时组135.76±10.46nmol/L，寒冷暴露6小时组184.59±11.52nmol/L）。随着冷刺激时间的延长，血管平滑肌内的钙离子浓度不断增加，两两比较差异明显（P0.05）。 6.寒冷暴露组血管平滑肌细胞钙离子通道α1C亚基的mRNA表达增加，对照组钙离子通道α1C亚基的mRNA为（0.42±0.03），分别暴露2、4、6小时的血管平滑肌细胞钙离子通道α1C亚基的mRNA分别为（0.49±0.04）（、0.58±0.06）、（0.75±0.08），与对照组相比有显著统计学差异（p0.01）。 结论： 1.寒冷环境的刺激可致大鼠血压应激性升高。 2.寒冷可致大鼠主动脉平滑肌细胞钙离子浓度升高。 3.寒冷致大鼠主动脉平滑肌细胞膜钙通道α1C亚基mRNA水平升高进而提示平滑肌细胞钙离子浓度增高是产生大鼠血压升高的可能病理基础。
[Abstract]:Objective:
Objective To observe the changes of blood pressure and the expression of calcium channel alpha 1C subunits in vascular smooth muscle cells (VSMC) exposed to low temperature for a long time in rats and in vitro.
Method锛

本文编号：1433826