去抗原异种松质骨与兔成骨细胞组织相容性的实验研究

发布时间：2018-01-18 14:34

  本文关键词：去抗原异种松质骨与兔成骨细胞组织相容性的实验研究　出处：《成都中医药大学》2012年硕士论文　论文类型：学位论文

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【摘要】：目的：观察不同方法制备的猪松质骨材料对异种抗原分布及表达的影响,研究不同方法制备的猪松质骨材料与乳兔来源的成骨细胞在体外复合培养后组织相容性的变化。为异种骨修复骨损关节病的临床应用提供一定的实验依据。 方法：分别采用深低温冷冻法、酶消化法和深低温冷冻加酶消化法制备猪松质骨材料。将实验分为A、B、C、D组。A组：新鲜猪骨组、B组：深低温冷冻组、C组：酶消化组、D组：深低温冷冻加酶消化组。分别采用苏木素—伊红染色和免疫组织化学的方法观察各组材料的组织学特征及α-Gal抗原、MHC-Ⅰ抗原和MHC-Ⅱ抗原的性状、分布及表达变化。并将不同方法制备的B、C、D组的猪松质骨材料与兔成骨细胞进行体外复合培养,采用倒置相差显微镜、普通光学显微镜、扫描电镜观察兔成骨细胞在猪松质骨材料中的黏附、生长及增殖特点。 结果：苏木素—伊红染色镜下可见新鲜猪骨材料中广泛分布骨陷窝、骨细胞、成骨细胞、大量的脂肪网架结构,内含骨髓细胞。深低温冷冻骨材料中含大量的骨陷窝,含少量的骨细胞、成骨细胞、骨髓细胞及脂肪网架结构。酶消化骨材料中含大量骨陷窝,含极少量的骨细胞、成骨细胞,骨髓腔中未见脂肪网架结构。深低温冷冻加酶消化骨材料中含大量骨陷窝,未见骨细胞、成骨细胞,骨髓腔中未见脂肪网架结构及骨髓细胞。免疫组化镜下可见新鲜猪骨材料中α-Gal抗原、MHC-Ⅰ抗原广泛表达在成骨细胞、骨髓细胞周围,MHC-Ⅱ抗原表达在骨髓细胞周围。深低温冷冻组的骨基质中含少量骨细胞残留,少量的膜蛋白表面有α-Gal抗原、MHC-Ⅰ抗原和MHC-Ⅱ抗原表达。酶消化组中骨陷窝内有少量骨细胞残留,膜蛋白表面含少量MHC-Ⅰ抗原和MHC-Ⅱ抗原表达,未见α-Gal抗原表达。深低温冷冻加酶消化组中未见α-Gal抗原、MHC-Ⅰ抗原和MHC-Ⅱ抗原表达。不同方法制备的猪骨材料与兔成骨细胞体外复合培养后,倒置相差显微镜下可见兔成骨细胞在B、C、D三个组别猪骨材料表面都有生长,扫描电镜下可见深低温冷冻加酶消化的猪骨材料表面有大量的细胞黏附、生长、繁殖并形成网状结构,其细胞外形为星形、多边形、多角形或短梭形,伪足交错呈网状覆盖骨材料孔隙表面。单纯酶消化的骨材料表面成骨细胞呈短梭形并延骨小梁排列,相互融合成网状结构的较少。深低温冷冻的骨材料表面有少量细胞生长、黏附,且细胞生长不充分。 结论：深低温冷冻加酶消化可以有效的去除异种抗原,而单纯采用深低温冷冻可以明显的减少异种抗原,但是不能完全的去除异种抗原。单纯采用酶消化法可以明显的减少cc-Gal抗原表达,但MHC-Ⅰ抗原和MHC-Ⅱ抗原不能完全去除。各组猪松质骨材料与兔成骨细胞体外复合培养后观察到深低温冷冻加酶消化制备后的骨材料在组织相容性方面优于单纯的深低温冷冻和单纯的酶消化法制备的骨材料。
[Abstract]:Objective: to observe the effect of porcine cancellous bone materials prepared by different methods on the distribution and expression of xenogeneic antigens. To study the changes of histocompatibility of porcine cancellous bone materials prepared by different methods and osteoblasts derived from newborn rabbits after co-culture in vitro, and to provide a certain experimental basis for the clinical application of heterogenous bone in repairing osteoarthropathy. Methods: porcine cancellous bone materials were prepared by deep cryopreservation, enzyme digestion and deep cryopreservation plus enzyme digestion. Group B: deep hypothermia freezing group: group C: enzyme digestion group. Group D: deep cryopreservation plus enzyme digestion group. The histological characteristics and 伪 -Gal antigen of each group were observed by hematoxylin eosin staining and immunohistochemistry. The characters, distribution and expression of MHC- 鈪，

本文编号：1441318