microRNA-223调控人胚胎干细胞向树突细胞分化

发布时间：2018-01-26 02:25

  本文关键词： 人胚胎干细胞 树突细胞 microRNA- 诱导分化 TGFBR　出处：《中国实验血液学杂志》2017年05期 　论文类型：期刊论文

【摘要】：目的:建立人胚胎干细胞(ESC)向树突细胞诱导分化的新策略,探讨microRNA-223(miR-223)在人胚胎干细胞源树突细胞产生过程中的调控作用及其分子机制。方法:采用人胚胎干细胞在胞外基质Ⅳ型胶原蛋白上直接贴壁培养,加入造血生长因子分步向造血干/祖细胞、共同髓系祖细胞和树突细胞诱导的方案,通过形态学、流式细胞术和造血集落形成实验鉴定分化细胞;人胚胎干细胞经慢病毒转染过表达miR-223或抑制其表达后启动向树突细胞分化,比较不同miR-223表达水平下分化细胞中造血集落形成的数目和表面标记物的表达量;应用双荧光素酶报告基因检测验证TGFBR3是miR-223发挥作用的直接靶标。结果:人ES细胞成功诱导为树突细胞,分化细胞中表达CD83比例可达82%,在整个分化过程中miR-223表达呈上调趋势;添加miR-223模拟物组分化细胞表达CD34~+CD45~+、CD34~+CD45~+以及CD83~+的比例均显著高于添加miR-223抑制剂组和阴性对照组(P0.05);添加miR-223抑制剂组分化细胞表达各阶段细胞标记物显著低于阴性对照组(P0.05);添加miR-223模拟物组分化细胞出现大约759个CFU/105细胞数,显著高于其它各组(P0.05);双荧光素酶报告基因结果显示,miR-223显著抑制TGFBR3-3'UTR结构的荧光素酶活性(下降了37%)(P0.05),而且TGFBR3-3'UTR突变型的荧光素酶活性显著高于野生型(P0.01);随着向树突细胞分化成熟,添加miR-223模拟物组分化细胞表达TGFBR3水平逐渐下降,而添加miR-223抑制剂组由于内源性miR-223受到抑制而明显上调TGFBR3的表达。结论:miR-223调控人胚胎干细胞向树突细胞分化,可能通过直接作用于靶标TGFBR3而促进胚胎干细胞源树突细胞的产生。
[Abstract]:Objective: to establish a new strategy for differentiation of human embryonic stem cells (ESCs) into dendritic cells. MicroRNA-223 miR-223). Regulation and molecular mechanism of dendritic cells derived from human embryonic stem cells methods: human embryonic stem cells were cultured on extracellular matrix type 鈪，

本文编号：1464392