GPS2基因敲除小鼠胚胎成纤维细胞的永生化及其增殖凋亡的检测

发布时间：2018-02-07 10:02

  本文关键词： 小鼠 基因敲除 成纤维细胞 胚胎结构 SVLT 永生化 细胞增殖 细胞凋亡　出处：《军事医学》2016年05期 　论文类型：期刊论文

【摘要】：目的利用SV40大T抗原(SV40LT)过表达慢病毒建立永生化的GPS2野生与敲除的小鼠胚胎成纤维细胞(MEF)系,并检测GPS2敲除对MEF增殖及凋亡的影响。方法构建p CDH-Flag-SV40LT-GFP慢病毒表达载体,并进行病毒包装。分离胚胎发育9.5 d(E9.5d)的MEF细胞,感染SV40LT慢病毒,连续传代培养50代以上,把仍存活且状态良好的GFP阳性细胞视作永生化成功的MEF细胞。利用高内涵细胞成像分析仪检测永生化MEF细胞的增殖情况,采用AnnexinⅤ/PI双染色、流式细胞仪检测细胞凋亡。结果成功构建p CDH-Flag-SV40LT-GFP慢病毒表达载体,获得滴度为4.03×108pfu/ml的病毒。分离E9.5d MEF细胞并感染上述病毒,阳性细胞扩大培养并稳定传代50代以上,成功建立了永生化的MEF细胞系。GPS2敲除MEF细胞的增殖能力明显低于野生型,而二者由于血清撤除所引起的凋亡并无明显差异。结论敲除GPS2抑制MEF细胞的增殖。
[Abstract]:Objective to establish immortalized GPS2 wild and knockout mouse embryonic fibroblast cell lines with lentivirus overexpression of SV40 large T antigen (SV40LTT), and to detect the effect of GPS2 knockout on MEF proliferation and apoptosis. Methods the expression vector of p CDH-Flag-SV40LT-GFP lentivirus was constructed. MEF cells were isolated and infected with SV40LT lentivirus and cultured for more than 50 generations. The GFP positive cells, which are still alive and in good condition, are regarded as immortalized successful MEF cells. The proliferation of immortalized MEF cells was detected by high content cell imaging analyzer. Annexin 鈪，

本文编号：1494115