系统性硬化动物模型的建立及白藜芦醇对其肺及皮肤病变的作用

发布时间：2018-02-13 21:56

  本文关键词： 系统性硬化 博来霉素 纤维化 SIRT1 白藜芦醇　出处：《北京协和医学院》2011年硕士论文　论文类型：学位论文

【摘要】：背景：系统性硬化(Systemic Sclerosis, SSc)是一种病因不明的结缔组织病(connective tissue disease, CTD),可累及多个系统。其中,皮肤及肺以纤维化为主要表现,肺部特征性表现为肺成纤维细胞增生及细胞外基质(extracellular matrix, ECM)沉积。SSc患者肺间质纤维化常呈进行性发展,目前缺乏有效的治疗手段,常常成为影响患者预后的重要因素。组蛋白去乙酰化酶(histone deacetylases, HDACs) SIRT1可能通过转化生长因子-β (transforming growth factor-p, TGF-p)介导的信号通路参与SSc纤维化病变的发病过程。本实验旨在寻找SSc抗纤维化治疗新的靶点和方向。 目的：在前期研究的基础上,探讨系统性硬化动物模型的建立及SIRT1的激动剂白藜芦醇(resveratrol, Res)对其肺及皮肤病变的作用。 方法：首先,应用博来霉素(bleomycin, BLM)连续皮下注射的方法,建立Balb/c小鼠SSc模型,观察其肺部及皮肤病变情况及去乙酰化酶SIRT1的表达情况。然后,应用SIRT1的激活剂Res饲喂进行干预,观察病变改善情况及SIRT1的表达。观察的主要指标有：肺组织及注射处皮肤苏木素-伊红(hematoxylin-eosin, HE)染色观察皮肤及肺组织病理改变；应用免疫组化方法检测皮肤及肺组织中α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin, α-SMA)含量；应用荧光定量PCR (RealTime-PCR)法检测肺组织中SIRT1、Ⅲ型前胶原及a-SMA的mRNA表达；应用羟脯氨酸(hydroxyprolein, HYP)试剂盒检测皮肤及肺组织HYP含量。 结果：BLM连续皮下注射4周后,小鼠HE染色可见皮肤增厚,肺泡间隔增厚、炎性浸润和部分区域纤维化表现,肺及皮肤a-SMA阳性细胞较对照组显著增多(P0.05),肺部Ⅲ型前胶原表达上升(P0.05)。停止给药后3周肺部病变仍较明显。SSc模型组小鼠SIRT1表达下降(P0.05)。应用Res干预后,皮肤及肺部病理改变有所减轻,皮肤及肺部a-SMA阳性细胞减少(部分剂量组P0.05),肺组织中SIRT1表达较模型组无显著差异。 结论：BLM连续皮下注射可成功诱导SSc小鼠模型,该模型可观察到明显肺部病变,且肺组织SIRT1基因的表达下降。应用Res干预后,皮肤及肺部病变有所减轻。
[Abstract]:BACKGROUND : Systemic sclerosis ( SSc ) is an unknown connective tissue disease ( CTD ) , which can involve multiple systems . Objective : To investigate the establishment of systemic sclerosis animal model and the effect of resveratrol ( Res ) on lung and skin lesions on the basis of previous studies . Methods : The expression of 伪 - smooth muscle actin ( 伪 - SMA ) of Balb / c mice was observed by continuous subcutaneous injection of Bleomycin ( Bleomycin ) . The expression of 伪 - smooth muscle actin ( 伪 - SMA ) was observed by immunohistochemical method . The expression of 伪 - smooth muscle actin ( 伪 - SMA ) in skin and lung tissues was observed by immunohistochemical method . The expression of 伪 - smooth muscle actin ( 伪 - SMA ) in skin and lung tissues was detected by immunohistochemical method . The contents of HYP in skin and lung tissues were detected by using hydroxyprolein ( HYP ) kit . Results : After 4 weeks of continuous subcutaneous injection , HE staining showed that skin thickening , alveolar septum thickening , inflammatory infiltration and partial area fibrosis showed a significant increase in lung and skin a - SMA positive cells ( P0.05 ) . Conclusion : The model of SSc mice can be successfully induced by continuous subcutaneous injection of blm . The model can observe the obvious lung lesions , and the expression of SIRT1 gene in the lung tissue decreases . After the application of Res intervention , the skin and lung diseases are alleviated .

【学位授予单位】：北京协和医学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2011
【分类号】：R-332;R593

【共引文献】

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本文编号：1509190