GST-Exo84质粒的构建和Exo84-2酿酒酵母突变菌株的构建

发布时间：2018-02-15 06:47

  本文关键词： Exo84基因 DYN2基因 mRNA剪接　出处：《山西医科大学》2011年硕士论文　论文类型：学位论文

【摘要】：目的 1.试图构建Exo84p质粒表达载体,为体外乙酰化组蛋白是否可以与Exo84p结合做准备。 2.制成组蛋白敲除/exo84-2变异菌株以观察DYN2基因内含子的剪接状况。 方法: 1.从酵母基因中,经PCR扩增出所需的Exo84p,经纯化后用XmaⅠ酶切,琼脂糖凝胶回收后与pGEX-2T载体连接,导入感受态细胞DH5α中,挑选出正确的克隆。 2.用PCR方法扩增出带LEU的基因片段,将扩增产物转入目的酵母X中,得到Exo84-2变异菌株。用RT-PCR技术检测Exo84-2突变体对DYN2基因第二外显子的保留/切除情况。 结果我们构建出Exo84质粒与Exo84-2变异菌株,并在Exo84-2变异菌株的背景下观察DYN2基因第二外显子保留/剪接的情况。 结论1实验成功构建出Exo84-2变异菌株。 2在Exo84-2变异菌株中,DYN2基因第二外显子被保留的效率比野生型低。
[Abstract]:Purpose. 1. The expression vector of Exo84p plasmid was constructed to prepare whether acetylated histone could bind to Exo84p in vitro. 2. Histone knockout mutant rexo 84-2 was prepared to observe the splicing of intron of DYN2 gene. Methods:. 1. Exo84p was amplified from yeast gene by PCR, then digested with Xma 鈪，

本文编号：1512670