诺如病毒衣壳蛋白在Tn5细胞中的表达及纯化

发布时间：2018-02-16 08:41

  本文关键词： 诺如病毒 病毒样颗粒 昆虫细胞 杆状病毒表达系统　出处：《四川大学学报(自然科学版)》2017年03期 　论文类型：期刊论文

【摘要】：将人诺如病毒VA387株ORF2基因插入载体pFastBac1中,转化DH10Bac感受态细胞获得Bacmid-NoV-ORF2;脂质体介导转染sf9昆虫细胞,获得表达NoV-ORF2的重组杆状病毒Ac-NoV-ORF2.冻融破碎经Ac-NoV-ORF2感染的Tn5细胞,离心收集上清进行分子筛纯化.10%SDS-PAGE分析结果显示,重组病毒感染的Tn5细胞可见特异的蛋白条带;目的蛋白条带为相对分子质量59kD和56kD的两个条带;电镜观察发现表达的诺如病毒衣壳蛋白成功装配成了大小约为40~50nm的VLPs.结果表明在Tn5细胞中实现了诺如病毒衣壳蛋白的表达和VLPs的装配.
[Abstract]:The ORF2 gene of human norovirus VA387 strain was inserted into the vector pFastBac1 and transformed into DH10Bac receptive cells to obtain Bacmid-NoV-ORF2. The recombinant baculovirus Ac-NoV-ORF2.The recombinant baculovirus Ac-NoV-ORF2 expressing NoV-ORF2 was obtained by transfection of sf9 insect cells mediated by liposome. Tn5 cells infected by Ac-NoV-ORF2 were frozen and thawed. The results of SDS-PAGE analysis showed that specific protein bands were found in Tn5 cells infected by recombinant virus, and the target protein bands were two bands of relative molecular weight 59 KD and 56 KD, respectively. Electron microscopy showed that the expressed norovirus capsid protein was successfully assembled into VLPs of about 40NV 50nm. The results showed that the expression of norovirus capsid protein and the assembly of VLPs were realized in Tn5 cells.
【作者单位】： 四川大学生命科学学院;成都生物制品研究所有限责任公司;
【基金】：自然科学基金(J1103518)
【分类号】：R373

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本文编号：1515110