低氧诱导的人肺泡Ⅱ型上皮细胞SDF1表达与HIF1及HIF2的关系研究
发布时间：2018-02-16 13:11
本文关键词： 低氧 A549细胞 SDF1 HIF IPF 出处：《华中科技大学》2011年硕士论文 论文类型：学位论文
【摘要】：目的:研究趋化因子SDF1(CXCL12)在常氧及低氧时人肺泡Ⅱ型上皮细胞(A549细胞)中的表达情况,及其表达与HIF1及HIF2关系。 方法:将A549细胞置于低氧(1.5%氧浓度)培养箱和常氧(21%氧浓度)培养箱中进行干预放置48h后,用实时定量RT-PCR检测常氧组和低氧组, SDF1,HIF-1α及HIF-2α的mRNA水平。而后通过转染化学合成的siHIF-1α,siHIF-2α下调HIF-1α及HIF-2α的mRNA水平。实时定量RT-PCR检测各组HIF-1α及HIF-2α及SDF1mRNA的变化情况。用western blot检测HIF-1α及HIF-2α蛋白水平的变化,ELISA检测SDF1在各组蛋白水平的变化。 结果:实时定量RT-PCR检测的结果,常氧组HIF-1α和HIF-2α的mRNA有一定水平的表达,但是SDF1mRNA水平几乎检测不到。相对于正常组,缺氧48h组的A549细胞中的HIF-1α,HIF-2α及SDF1mRNA水平均明显增高(p㩳0.05)。随后进行的RNA干扰,通过荧光实时定量RT-PCR发现相对于阴性对照组,siHIF-1α组的HIF-1α和SDF1mRNA,siHIF-2α组的HIF-2α、SDF1mRNA水平均能够显著下降,差异具有明显的统计学意义。说明siRNA干扰序列效果明显,而且HIF1和HIF2能够下调SDF1mRNA水平。Western Blot检测发现相对于阴性对照组siHIF-1α组的HIF-1α和siHIF-2α组HIF-2α均有一定程度的下降(p㩳0.05),但是较mRNA下降的水平为低。ELISA结果显示,缺氧的A549细胞培养上清中能够检测到低含量的SDF1蛋白表达。siHIF-1α和siHIF-2α组的SDF1蛋白含量相对于阴性对照组更低,差异具有统计学意义。但是siHIF-1α组和siHIF-2α组SDF1蛋白水平无明显差异,与mRNA水平的结果是一致的。 结论:人肺泡Ⅱ型上皮来源的A549细胞在低氧诱导情况下能够上调趋化因子SDF1表达,而这一过程可能受HIF1和HIF2调控的。HIF1和HIF2在调控Ⅱ型上皮细胞的SDF1时可能起着协同作用。这一发现为将来阐明在IPF发病过程中肥大的ATⅡAECs高表达SDF1相关机制及如何募集血液循环中的fibrocytes运动至受损部位参与肺纤维化的发生发展提供研究基础。这些也为HIFs/SDF1在IPF发病过程中的重要地位及其作为治疗靶点的提供一个新的依据。
[Abstract]:Aim: to investigate the expression of chemokine SDF1CXCL12 in human alveolar type 鈪，
本文编号：1515595
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