TLRs配基活化DC的功能特征及中药调节作用机制

发布时间：2018-02-27 08:32

本文关键词： 树突状细胞 Toll样受体辅助性T细胞玉屏风散　出处：《济南大学》2011年硕士论文　论文类型：学位论文

【摘要】：目的树突状细胞(dendritic cell, DC)作为体内功能最强大的专职抗原递呈细胞,是识别病原体入侵的第一道防线。DC可通过多种模式识别受体广泛识别病原模式分子,从而实现对某一类病原的广泛监视效应。DC的模式识别能力不但决定机体防范病原入侵的监视能力,同时也直接影响获得性免疫反应强度和模式。因此,DC表型变化及其与T细胞间交互作用规律是目前感染免疫研究领域的热点。中医药依据经典的营卫学说在抗感染、抗病毒等临床治疗中突现其优势,其中,中药复方玉屏风散(Yu-Ping-Feng, YPF)是中医固表抗邪的经典方药,并在抗病毒、抗感染的医疗实践中反复验证了有效性。因此,本研究拟重点探讨YPF调节DC模式识别及DC-T细胞间信息交流的作用机制。方法 1.中药YPF制剂的制备:根据YPF配方采用传统水提醇沉方法制备该复方制剂。 2. DC的体外培养:Balb/C小鼠的骨髓单个核细胞,体外GM-CSF联合IL-4诱导培养DC,在TLRs配基或联合中药YPF处理前后,观察DC模式识别受体(TLR3, TLR4, TLR5, TLR7, TLR9)以及表型特征和功能因子的表达情况。 3.采用流式细胞荧光抗体标记技术检测DC表面特征性分子(CD11C)、抗原递呈分子(MHC-II)、共刺激信号(CD80, CD86)等分子的表达状态。 4.采用RT-PCR技术检测DC模式识别受体TLR3, TLR4, TLR5, TLR7, TLR9及CD86,CD80,CD40,CCR7、IL-12p40等功能因子的转录状态。 5.采用DC-T细胞共培养方法,体外观察DC在TLRs配基刺激或药物处理前后,对T细胞亚群(Th1/Th2/Th17)分化的通讯能力。结果 1.TLRs配基促进小鼠骨髓来源DC的成熟并上调共刺激分子的表达在GM-CSF和IL-4联合诱导小鼠骨髓来源DC增殖与分化过程中,加入TLR3、TLR4、TLR5、TLR7、TLR9配基,可促进DC的成熟,DC表面MHC-Ⅱ分子、CD80和CD86表达水平显著升高(P0.05),其中,以TLR4配基LPS刺激组最为显著(P0.05)。另外,TLRs配基与小剂量LPS联合作用可进一步增加成熟DC的比例,上调DC细胞表面MHC-Ⅱ分子、CD80和CD86的表达水平,其中LPS和PolyI:C联合诱导组升高显著(P0.05)。 2. LPS与PolyI:C协同促进DC功能因子的表达 RT-PCR结果显示:TLRs配基诱导DC成熟的同时,可上调DC功能因子CCR7、IL-12P40的转录水平。与LPS或PolyI:C单独刺激组相比,LPS联合PolyI:C诱导的DC的多种功能因子如CCR7、IL-12P40、CD80、CD86转录水平显著上调(P0.05)。 3. YPF对DC的促增殖效应在DC的诱导培养体系中,YPF对小鼠iDC(CD11c+I-Ad-)具有明显的促增殖效应,CD11c+细胞比例和细胞绝对计数均明显升高(P0.05),MHC-Ⅱ、CD80、CD86等信号分子的比例相对下降(P0.05)。在LPS和PolyI:C联合诱导体系中,YPF可进一步促进DC成熟,上调MHC-Ⅱ、CD80、CD86等信号分子的表达水平。 4. TLRs配基诱导DC对T细胞亚群分化的影响 LPS诱导的DC可优势活化Th1类T细胞,上调细胞因子IFN-γ的分泌,降低IL-10的分泌(P0.05)。LPS联合polyI:C诱导的DC可增强Th1类细胞因子IFN-γ和IL-17的分泌,同时可抑制T细胞分泌炎性因子TNFα(P0.05)。LPS联合Flagellin诱导的DC可明显降低T细胞分泌IFN-γ和IL-17的能力,增强T细胞对IL-10的分泌(P0.05)。 5.中药YPF联合TLRs配基诱导DC对T细胞亚群分化的影响中药YPF在协同TLRs配基诱导DC成熟的同时,可进一步调节DC-T细胞间的信息传递。YPF联合LPS诱导的DC可增强T细胞分泌IFN-γ、IL-17和IL-10等细胞因子(P0.05),而对TNFα的分泌无明显影响;YPF联合LPS、polyI:C诱导的DC可降低IFN-γ和IL-17的分泌(P0.05),上调TNFα和IL-10的分泌(P0.05);YPF联合LPS、Flagellin诱导的DC可显著上调IFN-γ的分泌,抑制TNF-α、IL-17和IL-10的分泌。结论 1. TLRs配基可促进小鼠骨髓来源DC的成熟,并上调共刺激因子和迁移相关功能因子的表达,其中LPS是DC成熟的较好诱导剂。 2.与LPS相比,小剂量TLRs配基联合作用对DC的成熟和信息传递功能更有优势,其中以LPS和PolyI:C联合作用最为显著。 3.中药YPF可促进未成熟DC的增殖,同时可协同TLRs配基增强成熟DC高表达抗原递呈分子和共刺激信号等功能因子,调节DC-T细胞间的信息传递,优势诱导抗病毒、抗炎因子的表达,降低炎性因子的分泌能力。由此可见,中药YPF在增强DC成熟上调共刺激信号表达的同时,调节DC-T细胞间信息传递能力和传递微环境,优势促进T细胞发挥抗病毒、抗炎效应,清除病原菌,控制炎症的发展,提高机体抵抗病原侵袭的能力。
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【学位授予单位】：济南大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2011
【分类号】：R392.12

【参考文献】