心肌Cav1.2钙通道NT片段的提取纯化及其与CaM的相互作用
本文关键词： NT 提取 纯化 CaM GST pull-down实验 出处：《中国医科大学学报》2017年05期 论文类型：期刊论文
【摘要】：目的探讨心肌Cav1.2钙通道NT蛋白片段提取与纯化的方法,并研究其与CaM的相互作用。方法将NT的cDNA插入pGEX-6p-3质粒载体后,转化大肠杆菌BL-21感受态细胞,大量培养并利用异丙基硫代-β-D半乳糖苷(IPTG)诱导NT的GST融合蛋白表达,GS-4B beads分离纯化,Pre Scission蛋白酶切除GST标签,进行十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰氨凝胶电泳(SDSPAGE)检测蛋白纯度和相对分子质量。采用GST pull-down实验研究NT片段与Ca M的相互作用。结果 SDS-PAGE结果显示成功纯化获得NT蛋白片段,且具有较高的纯度。GST pull-down实验结果显示NT可与Ca M结合,且具有浓度依赖性。结论本研究成功制备与纯化了心肌Cav1.2钙通道NT蛋白片段,为深入研究蛋白相互作用及NT的生物学功能奠定了基础。
[Abstract]:Objective to investigate the extraction and purification of Cav1.2 calcium channel NT protein fragment and its interaction with CaM. Methods the NT cDNA was inserted into pGEX-6p-3 plasmid vector and transformed into Escherichia coli BL-21 receptive cells. GST fusion protein of NT was induced by isopropylthiothio- 尾 -D galactoside (IPTG) in a large amount. The expression of GS-4B beads was separated and purified. Pre Scission protease was used to remove the GST tag. The purity and relative molecular weight of the protein were determined by sodium 12 alkyl sulfate and polyacrylamide gel electrophoresis. The interaction between NT fragment and Cam was studied by GST pull-down. The results of SDS-PAGE showed that NT protein fragment was purified successfully. The results showed that NT could bind to Cam in a concentration-dependent manner. Conclusion the NT protein fragment of Cav1.2 calcium channel was successfully prepared and purified in this study. It lays a foundation for the further study of protein interaction and the biological function of NT.
【作者单位】： 中国医科大学药学院药物毒理学教研室;
【基金】：国家自然科学基金(31400981,31471091) 大学生创新计划项目(2015069,201510159068,201510159047,201610159000064)
【分类号】：R3411
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，本文编号：1548879
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