A型流感病毒PB1-F2蛋白与蛋白激酶R相互作用研究

发布时间：2018-03-01 08:05

  本文关键词： A型流感病毒 PB-F 蛋白激酶R 蛋白磷酸化　出处：《动物医学进展》2017年05期 　论文类型：期刊论文

【摘要】：为研究A型流感病毒的重要毒力因子PB1-F2对蛋白激酶R(PKR)的调控机制,通过纯化GST-PB1-F2融合蛋白,利用GST pull-down试验证实了PB1-F2与PKR发生相互作用;采用免疫荧光试验进一步验证了二者的相互关系;实时荧光定量PCR表明PB1-F2能负调控PKR及IL-6的mRNA水平;采用siRNA干扰PKR基因的表达后,PB1-F2抑制IL-6的mRNA转录作用更显著。进一步运用蛋白免疫印迹方法检测了PB1-F2对PKR及其底物eIF-2α蛋白磷酸化水平的影响,显示过表达PB1-F2后,PKR及eIF-2α的磷酸化表达水平明显下调。本研究表明PB1-F2与PKR相互作用而抑制PKR磷酸化活化,并通过PKR调控IL-6的表达,为探索PB1-F2的未知生物学功能提供了重要信息。
[Abstract]:In order to study the regulatory mechanism of PB1-F2, an important virulence factor of influenza A virus, GST-PB1-F2 fusion protein was purified and the interaction between PB1-F2 and PKR was confirmed by GST pull-down test. The real-time fluorescence quantitative PCR showed that PB1-F2 could negatively regulate the mRNA level of PKR and IL-6. SiRNA interfered with the expression of PKR gene, and PB1-F2 inhibited the mRNA transcription of IL-6 significantly. The effect of PB1-F2 on the phosphorylation of eIF-2 伪 protein in PKR and its substrate was detected by Western blot. The results showed that the phosphorylation level of PB1-F2 and eIF-2 伪 was significantly down-regulated after overexpression of PB1-F2. This study indicated that the interaction between PB1-F2 and PKR inhibited the activation of PKR phosphorylation and provided important information for exploring the unknown biological function of PB1-F2 through the regulation of IL-6 expression by PKR.
【作者单位】： 吉林大学人兽共患病教育部重点实验室人兽共患病研究所;吉林农业大学动物科学技术学院;
【基金】：国家重点基础研究发展计划(973计划)(2012CB518901)
【分类号】：R373.13

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本文编号：1551080