视黄醇结合蛋白7基因（rbp7）对大鼠肝再生的作用研究
发布时间：2018-03-12 23:08
本文选题：肝再生 切入点：视黄醇结合蛋白7基因 出处：《河南师范大学》2012年硕士论文 论文类型：学位论文
【摘要】：视黄醇结合蛋白7(rbp7)又被称为胞内视黄醇结合蛋白4(CRBPⅣ)，主要运输胞内视黄醇类物质。目前还没有关于rbp7基因在肝再生中作用的研究。本实验室采用基因芯片Rat Genome2302.0检测再生肝中rbp7基因的表达情况，结果显示rbp7在肝再生进展阶段(6-72h)的30h和72h基因表达上调，72h时达到表达高峰，这说明rbp7基因是大鼠肝再生相关基因，为了进一步研究rbp7在肝再生中的作用，本文以大鼠再生肝为材料，参照NCBI中rbp7的mRNA序列设计引物，采用分子克隆的方法克隆出rbp7基因，并构建出了它的表达载体干涉载体和检验载体。通过体外实验将pEGFP-N1-rbp7pEGFP-N1pGenesil-1.0-rbp7(190)和pGenesil-1.0-HK等4种质粒采用脂质体转染法转入BEL-7402细胞内，，用G418筛选出稳定转染细胞株，并进行以下检测：采用活体观察和HE染色进行细胞形态观察；通过细胞计数和MTT法进行生长曲线的测定；PCNA免疫组化检测细胞增殖；Hochest33258染色检测细胞凋亡；甲基纤维素半固体培养基检测细胞的恶性增殖程度；药物MTT法检测细胞的耐药性，为进一步研究rbp7在肝再生中的作用奠定了基础，也为揭示肝再生分子机制提供信息。体内实验采用液压转基因技术将质粒分别注入2/3肝切除大鼠体内，并检测转染这些质粒后大鼠的死亡率组织显微结构以及肝再生率，以判断rbp7对肝再生的影响。 结果发现，pEGFP-N1-rbp7的细胞形态与BEL-7402细胞基本相同，但细胞核发生固缩，变小；细胞的生长曲线显示在生长后期转染pEGFP-N1-rbp7的细胞比转染对照pEGFP-N1的细胞生长要稍快些；PCNA和Hochest33258凋亡染色显示rbp7不会引起细胞凋亡；甲基纤维素固体培养基实验显示pEGFP-N1-rbp7可能增加了BEL-7402细胞的恶性增殖程度；药物MTT检测则发现，rbp7基因对氨基酸衍生物L-4-氟苯丙胺酸无明显的耐药性。体内实验表明，pEGFP-N1-rbp7组比对照PH组的肝再生率高，120h后pGenesil-1.0-rbp7(190)组要比pEGFP-N1-rbp7组的肝再生率低。综上所述，肝再生相关基因rbp7可能有促进细胞增殖增加肝癌细胞恶性增殖程度和促进肝再生的作用。
[Abstract]:Retinol binding protein 7rbp7), also known as intracellular retinol binding protein 4 (CRBP 鈪
本文编号：1603715
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