不同肠内营养干预对IBD模型幼鼠生长因子表达及胫骨近端骨骺生长板生长作用的研究

发布时间：2018-03-20 16:02

本文选题：儿童　切入点：炎症性肠病　出处：《复旦大学》2012年硕士论文　论文类型：学位论文

【摘要】：[目的]探索IBD专用配方奶、短肽类配方奶、普通配方奶及正常饮食肠内营养干预在IBD模型幼鼠疾病的不同时期对IGF-1、IGFBP3表达及胫骨近端骨骨骺软骨增殖、分化作用的影响。比较何种肠内营养更能持续缓解病情,并最大程度促进生长发育,为临床营养干预方式的选择提供实验室依据。[方法]选择4-5周(体重80-110g)SD大鼠为实验对象,共147只,随机分为8组。4个模型组,专用奶组22只,短肽组21只,普通奶组及正常饮食组各20只；4个对照组,每组16只。模型组应用TNBS灌肠造模,造模后即分别给予IBD专用配方奶(IBD-Modulen)、短肽类配方奶(小百肽)、普通配方奶(雀巢能恩)及正常饮食；对照组给予所需TNBS相同剂量的生理盐水灌肠,灌肠后亦分别给予IBD专用配方奶、短肽类配方奶、普通配方奶及正常饮食。模型组与对照组均自由饮食,每天记录饮食、体重变化及大便情况。各组在灌肠后第7、14天分别随机抽取8-10只大鼠处死,留取结肠、回肠、右侧胫骨及血标本。结肠及回肠标本进行HE染色,观察肠壁及粘膜病理变化。测量各组大鼠胫骨长度并截取近端骨骺段,HE染色后观察生长板软骨生长情况,免疫组化法检测GHR及IGF-1R的表达情况。ELISA法检测血清IGF-1及IGFBP3的表达。[结果]1.进食情况：各模型组1周内进食量明显少于相应对照组。模型组中,短肽组4天内平均每天进食量多于其他3组,5天-1周内多于其他2种配方奶组,但与正常饮食组进食量相当。7天后各模型组进食量渐恢复正常。正常饮食组进食量最多,IBD专用奶组与短肽组进食量无明显差异,普通奶组进食量最少。2.体重变化情况：(1)模型组：造模后第4天各组体重(g)较造模当天均有明显下降,短肽组普通奶组’专用奶组(-0.61±13.5vs-5.61±12.8、-9.59±10.3,P*P*均0.05)；正常饮食组体重下降程度是短肽组的2.9倍(P0.05)。造模后第7天短肽组体重增量(g)普通奶组*专用奶组(12.06±16.7vs5.14±19.1、0.14±17.7,P*P均0.05)；与正常饮食组体重增长程度无显著差异(P0.05)。造模后第14天短肽组体重增量专用奶组*普通奶组(P*P0.05)。而正常饮食组体重增量(g)明显高于3种配方奶组(84.35±18.0vs25.35±31.8、35.26±27.2、23.36±23.5,P0.05)。(2)对照组：第4、7、14天普通配方奶组体重增量(g)均明显少于专用配方奶组、短肽类配方奶组及正常饮食组(P均0.05)。3.胫骨长度情况：(1)模型组：造模后第7天短肽组平均胫骨长度(cm)正常饮食组专用奶组*(3.21±0.10vs2.98±0.11、3.06±0.15,P*P均0.05)；余组间差异不明显。第14天普通奶组平均胫骨长度(cm)专用奶组*正常饮食组(3.16±0.12vs3.33±0.10、3.37±0.99,P*P0.05)；短肽组胫骨未明显长于其他饮食干预组。第14天较第7天平均胫骨长度的增长幅度在正常饮食组最大(13.1%),其次分别是专用奶组(8.8%),短肽组(3.1%)及普通奶组(2.6%)。(2)对照组：第7天各组平均胫骨长度差异无统计学意义。第14天普通奶组平均胫骨长度(cm)短肽组*专用奶组正常饮食组#(3.25±0.09vs3.39±0.09、3.43+0.07、3.49±0.99,P*PP#均0.05)。短肽组平均胫骨长度与专用奶组及正常饮食组无明显差异。第14天较第7天平均胫骨长度的增长幅度在正常饮食组最大(8%),其次分别是短肽组(6.6%),专用奶组(4.9%)及普通奶组(2.2%)。4.回肠及结肠病理改变：(1)模型组：各组第7天回肠壁水肿明显,解剖层次不清晰,肠绒毛损伤。以普通奶组最明显,短肽组最不明显。专用奶组、正常饮食组及普通奶组结肠均出现不同程度炎性细胞浸润及溃疡,短肽组肠病理变化明显轻于其它3组,无明显炎症细胞浸润及溃疡。第14天较第7天各组回肠壁水肿明显减轻,解剖层次清晰,绒毛修复；结肠组织溃疡修复,炎症细胞浸润明显较前减轻。(2)对照组：各组7、14天时回肠及结肠壁无水肿,解剖层次清晰,肠粘膜无损伤、无溃疡,无明显炎症细胞浸润。5.IGF-1与IGFBP3的表达情况：(1)IGF-1的表达情况：模型组第7天短肽组血IGF-1的表达(mg/ml)专用奶组*普通奶组正常饮食组#(3.79±0.42 vs 2.93 ±0.89.2.69±0.49.2.58±0.50,P*P*P#均0.05),余组间差异不明显。短肽模型组正常饮食对照组*短肽对照组(3.79±0.42 vs 3.08±0.48.2.82±0.40, P* =0.007,P=0.000).模型组第14天IGF-1的表达在短肽组最高,普通奶组最低,但各组间差异无统计学意义。对照组第7天IGF-1的表达(ng/ml)在正常饮食组及专用奶组均高于短肽组及普通奶组,但组间差异无统计学意义。第14天正常饮食组表达量普通奶组(4.02±1.49 vs 2.94±0.73,P=0.033),略高于专用奶组及短肽组,但差异无统计学意义。(2)IGFBP3的表达情况：模型组第7天短肽组血IGFBP3的表达量(ng/ml)正常饮食组(21.28±4.52vs16.11±2.86,P0.05),略高于专用奶组及普通奶组,但差异无统计学意义。第14天正常饮食组表达量(ng/ml)普通奶组(20.49±5.39vs15.62±5,22,P0.05),略高于专用奶组及短肽组,但差异无统计学意义。对照组第7天IGFBP3的表达在正常饮食组最高,普通奶组最低,但各组间表达水平差异无统计学意义。第14天IGFBP3的表达正常饮食组IGFBP3的表达水平普通奶组*短肽组(21.50±4.81vs16.58±4.72、15.32±4.49,P*P均0.05),略高于专用奶组(P0.05)6.胫骨病理及免疫组化：(1)骨骺生长板厚度：各模型组第7天软骨生长板厚度短肽组普通奶组正常饮食组专用奶组。第14天专用奶组、正常饮食组生长板厚度较第7天明显增厚；普通奶组生长板厚度较7天时变薄。各对照组间第7天短肽组及普通奶组相对较薄,而专用奶组与正常饮食组较厚；第14天普通奶组生长板明显较其他三组薄。(2)骨骺生长板增生区及肥大区细胞计数：第7天各模型组骨骺生长板增生区及肥大区软骨细胞数(个/10cm2),短肽组正常饮食组≥专用奶组(66.0±16.1vs51.2±6.6、47.9±6.3,P*P均0.05)。第14天各模型组骨骺生长板增生区及肥大区软骨细胞数(个/10cms),短肽组专用奶组正常饮食组,但差异无统计学意义；对照组第7天专用奶组增生区及肥大区细胞数明显多其他3组(P0.05),余组间差异不明显；第14天普通奶组细胞数(个/10cm2)明显少于其他3组(P0.05),余组间差异不明显。(3)GHR与IGF-1R的表达情况：GHR在整个骨骺生长板区域均有表达,但免疫组化切片显示其主要表达于静止细胞区。模型组第7、14天各组表达强阳性的细胞计数差异无统计学意义(P0.05)。IGF-1R在整个骨骺生长板区域均有表达,免疫组化切片显示其主要表达于增生及肥大细胞区。模型组第7、14天短肽组表达量明显高于其他组。在第7天短肽组增生及肥大区细胞数亦明显多于正常饮食组及专用奶组(P0.05)。但第14天短肽组该区细胞数亦多余上述两组,但差异无统计学意义(P0.05)。[结论]短肽类配方奶在造模后一周内可迅速缓解IBD模型鼠肠道炎症反应、改善营养状况,促进IGF-1、IGFBP3及IGF-1R的表达,加速长骨的生长。第二周这种优势减弱。
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【学位授予单位】：复旦大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2012
【分类号】：R-332;R725.7

【参考文献】