阿维A调节外周血树突状细胞相关免疫功能的实验研究

发布时间：2018-03-27 13:27

  本文选题：阿维A　切入点：树突状细胞　出处：《河北医科大学》2012年硕士论文

【摘要】：目的：树突状细胞(dendritic cells, DCs)是体内功能最强的、专职的抗原呈递细胞（antigen presenting cell, APC），是唯一能够激活“初始型”免疫反应的细胞，可显著地刺激初始T细胞的增殖和活化，在免疫应答的启动和免疫调控方面发挥着重要作用，是最强大的次级免疫反应的诱导物。 维甲酸类（retinoc acid,RA）是维生素A的天然及人工合成的衍生物。包含多种同分异构体：13-顺式维甲酸（13-cis-retinoic acid,13-cRA），全反式维甲酸(all-trans retinoic,ATRA)，9-顺式维甲酸(9-cis-retinoicacid,9-cRA)等。它能影响细胞的增殖和分化，调控多种细胞的形态变化并参与细胞凋亡代谢过程，在临床实践中多用来预防及治疗多种皮肤病。近年来科学研究发现它对人体免疫系统具有很强的调节作用。阿维A为第二代维甲酸类药物，化学名称是全反式-9-（4-甲氧基-2，3，6-三甲基苯基）-3，7-二甲基-2，4，6，8-壬四烯酸，具有调节表皮细胞分化和增殖的作用，临床上用于治疗多种皮肤病，如银屑病、角化性皮肤病等。 本实验研究阿维A作用于正常人外周血DCs通过观察DCs的形态，流式细胞仪技术检测DCs表面标记CD83、CD86的表达，应用酶联免疫吸附实验检测细胞因子IL-12的量及用同种异体混合淋巴细胞反应来评价DCs刺激T淋巴细胞增殖的能力，来探讨阿维A调节人免疫系统的机制，进而为临床治疗自身免疫性疾病提供实验基础。 方法： 1细胞培养 采集并分离10例健康人外周血单个核细胞在含15%胎牛血清的RPMI-1640培养基（含青霉素100U/ml，含链霉素100U/ml，PH7.2）和rhIL-4和rhGM-CSF的作用下，置于5%CO2和37℃培养箱中培养。 2运用流式细胞仪技术（Flow cytometry，FCM）检测与细胞免疫成熟和激活相关的表面标记CD83的表达情况 将实验分为3组，分别为阴性对照组和两个加药组，加药组分别为阿维A浓度为1nmol/L一组和阿维A浓度为10nmol/L一组。阴性对照组不加阿维A培养8天，加药组在培养第7天按药物的不同浓度加入药物干预12h，收集细胞，应用FCM检测各组细胞表面标记CD83的表达情况。 3运用FCM检测与细胞免疫成熟和激活相关的表面标记CD86的表达情况 将实验分为3组，分别为阴性对照组和两个加药组，加药组分别为阿维A浓度为1nmol/L一组和阿维A浓度为10nmol/L一组。阴性对照组不加阿维A培养8天，加药组在培养第7天按药物的不同浓度加入药物干预12h，收集细胞，应用FCM检测各组细胞表面标记CD86的表达情况。 4倒置相差显微镜观察经过不同浓度药物处理前后DCs的形态变化。 5用酶联免疫吸附实验(ELISA)检测不同浓度的阿维A对DCs干预12h后细胞因子的分泌的影响。 将实验分为3组，分别为阴性对照组和两个加药组，加药组分别为阿维A浓度为1nmol/L一组和阿维A浓度为10nmol/L一组。阴性对照组不加阿维A培养8天，加药组在培养第7天按药物的不同浓度加入药物干预12h，收集细胞的培养上清液，应用ELISA法检测各组细胞培养上清液中IL-12的水平。 6用同种异体混合淋巴细胞反应来评价DCs刺激T淋巴细胞增殖的能力 用四甲基偶氮唑蓝（MTT）比色法检测各组DCs对同种异体混合淋巴细胞增殖的程度。 7运用统计软件SPSS13.0对数据进行统计分析。 结果： 1运用FCM检测与细胞免疫成熟和激活相关的表面标记CD83的表达情况。 经不同浓度药物作用后，与阴性对照组相比，表面标记CD83的表达明显增高，阴性对照组、不同浓度阿维A干预12h后，CD83的表达量分别为42.55±10.58、52.93±12.87、59.80±12.47，分别进一步进行两两比较也都有显著性差异（p＜0.05）。 2运用FCM检测与细胞免疫成熟和激活相关的表面标记CD86的表达情况。 经不同浓度药物作用后，与阴性对照组相比，表面标记CD86的表达明显增高，阴性对照组、不同浓度阿维A干预12h后，CD86的表达量分别为57.49±10.63、67.24±10.55、72.89±10.18，分别进一步进行两两比较也都有显著性差异（p＜0.05）。 3阿维A对DCs形态的影响 阴性对照组：DCs形态不规则，少部分细胞贴壁生长，大部分细胞呈悬浮状态生长；经阿维A处理细胞12h后，通过倒置显微镜观察，贴壁生长的细胞减少，悬浮生长的细胞增多，并随浓度增加悬浮生长的细胞增多的现象更加明显。 4用ELISA法检测阿维A对DCs分泌的IL-12水平的影响。 经不同浓度药物作用后，与阴性对照组相比，分泌的IL-12的量逐渐增多。阴性对照组、不同浓度阿维A干预12h后IL-12的分泌量分别为50.047±22.660、59.762±23.299、74.657±26.252，分别进一步进行两两比较差异也都有显著性差异（p＜0.05）。 5用MTT比色法检测阿维A处理前后各组细胞对同种异体淋巴细胞的增殖的变化。 经不同浓度药物作用后的DCs刺激的混合淋巴细胞的增殖率(10.96±1.41，11.88±1.38)与阴性对照组(5.29±0.69)相比明显上调（p＜0.05），但两加药组之间比较无统计学差异。 结论： 1.阿维A对DCs细胞表面标志CD83、CD86的表达有增强作用。 2阿维A可以增强DCs对同种异体混合淋巴细胞增殖的刺激作用。 3.阿维A可以促进DCs细胞因子IL-12的分泌。 4阿维A可增强DCs的抗原提呈能力并可促进DCs向成熟方向分化。
[Abstract]:Objective: dendritic cells (dendritic, cells, DCs) are the most potent antigen-presenting cell, (antigen presenting, cell, APC) is the only way to activate the "initial" immune cells, can significantly stimulate initial T cell proliferation and activation plays an important role in the initiation and regulation of immune immunity in response, inducer of secondary immune response of the most powerful.
Retinoic acid (retinoc acid RA) is vitamin A, natural and synthetic derivatives. Contains a variety of isomers: 13- CIS retinoic acid (13-cis-retinoic, acid, 13-cRA) and all trans retinoic acid (all-trans, retinoic, ATRA, 9-) CIS retinoic acid (9-cis-retinoicacid, 9-cRA) it. Can influence cell proliferation and differentiation, morphological changes of cells and regulate various metabolic processes involved in cell apoptosis, in clinical practice for the prevention and treatment of various skin diseases. In recent years, scientific research found that it has a strong effect on regulating the immune system. Avi A is the second generation of retinoids, chemical name all trans -9- (4- methoxy methyl phenyl -2,3,6- three -3,7- two -2,4,6,8- four) methyl nonyl acid, can regulate the differentiation and proliferation of epidermal cells, clinically for the treatment of various skin diseases, such as psoriasis, keratotic skin disease.
The experimental study on the effect of A on acitretin in normal human peripheral blood DCs by observing the morphology of DCs, flow cytometry, DCs surface markers CD83, CD86 expression, ability of application of ELISA detection of IL-12 cytokines and quantity of experiment with allogeneic mixed lymphocyte reaction to evaluate DCs stimulated T lymphocyte proliferation, mechanism to investigate the regulation of avermectin A the immune system, so as to provide experimental basis for clinical treatment of autoimmune diseases.
Method锛，

本文编号：1671704