NMDA受体在大鼠胎肺中的表达及对大鼠胎肺发育的影响

发布时间：2018-03-31 22:00

  本文选题：N-甲基-D-天冬氨酸　切入点：N-甲基-D-天冬氨酸受体　出处：《中南大学》2011年硕士论文

【摘要】：目的：观察正常大鼠孕15天至孕21天胎肺中是否有NMDA受体的表达,并通过孕15天胎肺器官培养模型,观察NMDA受体激活对大鼠胎肺发育的影响及对调节胎肺发育有重要作用的TTF-1表达的影响。 方法 1.孕鼠制备：200-250gSD雌性大鼠与300-350g雄鼠1:1合笼,次日晨见阴栓确定为孕0天(E0) 2.胎肺组织NMDAR mRNA测定：荧光定量PCR测定孕15天至21天胎肺NMDA1, NMDA2A,NMDA2B, NMDA2C, NMDA2D, NMDA3A,NMDA3B受体mRNA的表达。 3.胎肺器官培养及分组：将胎肺置于transwell板的微孔膜上(直径：0.8um),使其处于气液交界处,采用含有青霉素(100U/mL),氯霉素(100ug/mL)的无血清BGJb培养基,37℃,5%CO2条件下培养。试验分组：对照组：培养基中不加任何处理。处理组：在培养基中添加NMDA (sigma公司),终浓度为1mmol/L 4.培养胎肺一般情况：每24hr胎肺大体面积变化,每48hr胎肺湿重,胎肺分支情况。 5.胎肺病理学检查：上皮细胞分化情况,单位囊泡周径,单位囊泡面积,单位肺实质面积,单位囊泡面积与肺实质面积比。 6. TTF-1 mRNA测定：荧光定量PCR测定对照组与处理组培养不同时间TTF-1 mRNA的表达量的变化。 7.统计学分析：实验数据用均数±标准差表示,多组间比较用单因素方差分析(one-way ANOVA)及SNK-q检验,两组间比较用T检验。p0.05认为有统计学意义。 结果 1.胎肺组织NMDAR表达：正常大鼠孕15天至孕21天胎肺组织存在NMDAR1, NMDAR2A, NMDAR2B, NMDAR2C, NMDAR2D, NMDAR3A, NMDAR3B表达。孕15天至孕17天胎肺以NMDAR3C表达为主,孕18天至孕20天以NMDAR2A表达为主,21天胎肺以NMDAR2D表达为主。 2.胎肺培养情况：随着培养时间延长,胎肺湿重增加(p0.05),面积增大(p0.05),支气管分支越来越多,越分越细。 3.培养胎肺HE染色：培养96hr内,随着培养时间的延长,肺上皮细胞由高柱状上皮细胞向立方上皮细胞分化,单位囊泡周径增大(p0.01),单位囊泡面积增大(p0.05),单位肺实质面积减小(p0.05),囊泡面积/肺实质面积比值增大(p0.05) 4.培养胎肺TTF-1 mRNA表达变化：随着培养时间延长,TTF-1mRNA表达量增加(p0.05) 5.NMDA对培养胎肺的影响：NMDA(1mmol/L)处理组培养胎肺肺单位囊泡周径减小(p0.05),单位囊泡面积减小(p0.01)单位肺实质面积增多(p0.01),囊泡面积与肺实质面积比降低(p0.01),但胎肺面积、胎肺湿重、TTF-1 mRNA的表达量与处理组比较无统计学差异(p0.05)结论 1.成功建立了大鼠胎肺器官培养模型。 2.首次观察了正常大鼠孕15天至孕21天胎肺组织存在NMDAR1, NMDAR2A, NMDAR2B, NMDAR2C, NMDAR2D, NMDAR3A, NMDAR3B mRNA的表达及其动态变化。 3.首次发现NMDA受体的激活可抑制大鼠胎肺的发育,其抑制胎肺发育的分子机制与TTF-1mRNA表达无关。
[Abstract]:Objective : To observe the expression of NMDA receptor in fetal lung from 15 to 21 days of pregnancy in normal rats , and observe the effect of NMDA receptor activation on fetal lung development in rats and the effect of NMDA receptor activation on the development of fetal lung .

method

1 . Preparation of pregnant rats : 200 - 250 g SD female rats and 300 - 350 g of male rats 1 : 1 , and the morning of the following day was determined as 0 days of gestation ( E0 )

2 . NMDAR mRNA determination of fetal lung tissue : expression of NMDA1 , NMDA2A , NMDA2B , NMDA2C , NMDA2D , NMDA3A , NMDA3B receptor mRNA was determined by fluorescence quantitative PCR .

3 . Fetal lung organ culture and grouping : The fetal lung was placed on the microporous membrane of transwell plate ( diameter : 0.8um ) , it was cultured under the conditions of serum - free BGJb medium containing penicillin ( 100 U / mL ) and chloramphenicol ( 100 ug / mL ) , and cultured at 37 鈩，

本文编号：1692623