中国西南地区猕猴感染内阿米巴的分子流行病学调查

发布时间：2018-04-02 09:57

本文选题：猕猴　切入点：内阿米巴　出处：《复旦大学》2012年硕士论文

【摘要】：目的在圈养和野生的非人灵长类动物的粪便中经常可以检测到多种内阿米巴原虫。这些内阿米巴原虫大都属于非致病性的,但是也有具有致病力的溶组织内阿米巴或者可能有潜在致病力的诺氏内阿米巴。非人灵长类动物感染溶组织内阿米巴或者诺氏内阿米巴后,不仅其健康受到影响,更重要的是这些感染的非人灵长类动物有可能成为潜在的阿米巴病的传染源,影响人类的健康。因此,有必要对非人灵长类动物进行内阿米巴原虫感染的流行病学调查,同时对其感染的进行溶组织内阿米巴、诺氏内阿米巴与其他非致病性的内阿米巴的鉴别诊断。一般病原学检查主要是通过显微镜镜检检测粪便中的阿米巴原虫的包囊或者滋养体。然而,对于溶组织内阿米巴、诺氏内阿米巴与其他内阿米巴种属难以通过形态进行鉴别。近年来高敏感性和特异性的分子生物学诊断方法(如PCR、分子杂交等方法)被广泛应用于内阿米巴原虫的诊断和鉴别诊断。本研究采用PCR方法对中国西南地区猕猴内阿米巴的感染情况进行调查,从而了解非人灵长类动物体内阿米巴与人类阿米巴感染之间的关系。方法共收集955份粪便样品,其中152份和88份分别来自于桂林和南宁的两个食蟹猴养殖场；120份和595份分别来自于广西和贵州的野生恒河猴群。粪便经包囊富集后镜检。提取粪便中的基因组DNA后,分别以特异性引物扩增溶组织内阿米巴、迪斯帕内阿米巴、诺氏内阿米巴、夏氏内阿米巴和结肠内阿米巴的18S核糖体核苷酸RNA基因。2%的琼脂糖凝胶鉴定PCR扩增产物的大小。Qiagen胶回收试剂盒割胶回收PCR产物,连入pMD-19T测序载体并测序。测序结果用ClustalX Ver1.83分析。结果PCR结果显示,916份样本中至少对一种内阿米巴显示阳性,39份样本PCR扩增为阴性。在广西、贵州、桂林和南宁的样品中,夏氏内阿米巴的阳性率分别是100%、98.0%、93.4%和61.3%,结肠内阿米巴的阳性率分别是70.3%、81.2%、94.1%和73.9%。在桂林、南宁和广西的粪便样品里,迪斯帕内阿米巴的阳性率分别是82.9%、51.1%和13.3%,而贵州野生恒河猴体内未检出迪斯帕内阿米巴。广西和贵州野生恒河猴体内的诺氏内阿米巴检出率较高,阳性率分别为62.5%和61.3%,桂林和南宁的圈养食蟹猴的粪便样品未检出诺氏内阿米巴。所有的粪便样品均为溶组织内阿米巴阴性。测序结果显示,所有标本的诺氏内阿米巴18SrRNA基因的扩增产物序列没有差异,与已报道的诺氏内阿米巴NASA6株的18SrRNA基因序列的重叠部分(452个核苷酸)仅有一个核苷酸位点的差别,同源性为99.8%。夏氏内阿米巴18S rRNA基因的特异性扩增产物序列与AF149912一致。迪斯帕内阿米巴的测序结果显示与AB282661一致。结肠内阿米巴18SrRNA基因特异性扩增产物测序结果显示该原虫有3种不同的基因序列,其中两类分别与结肠内阿米巴亚型1和亚型2一致,而另一个序列与目前报道的序列有比较显著的差异。结论本研究以种特异性引物进行PCR扩增方法对中国西南地区的圈养食蟹猴和野生恒河猴进行大样本的内阿米巴流行病学调查。研究显示中国西南地区野生恒河猴感染有诺氏内阿米巴,未感染致病性溶组织内阿米巴。诺氏内阿米巴、夏氏内阿米巴、结肠内阿米巴和迪斯帕内阿米巴的高感染率,提示了内阿米巴在每个地区猕猴个体间的广泛传播。另外,我们发现了一种仅在我国存在的结肠内阿米巴分离株基因型,而国外未见报道。总之,由于这些圈养的食蟹猴和野生恒河猴与人类接触频繁,鉴于其感染的内阿米巴的人兽共患潜力,因而对其内阿米巴感染情况进行调查和监控具有及其重要的社会意义。
[Abstract]:Objective To investigate the relationship between amoebic and human amebic infection in non - human primates by means of PCR , which is widely used in the diagnosis and differential diagnosis of amoebas in human primates .

Methods A total of 955 stool samples were collected , of which 152 and 88 were from two cynomolgus monkey farms in Guilin and Nanning , respectively ;
Two hundred and five hundred and five hundred and nine wild rhesus monkeys from Guangxi and Guizhou , respectively , were collected from Guangxi and Guizhou province .

Results The results showed that there was no difference in the positive rates of amoebas in the samples of wild rhesus monkeys in Guangxi , Guizhou , Guilin and Nanning . The positive rates were 82.9 % , 81.2 % , 94.1 % and 73.9 % respectively .

Conclusion This study shows that the high infection rates of amoebic , amoebic , amoebic , amoebic , amoebas and amoeba in the wild rhesus monkeys in Southwest China have been investigated by PCR amplification method . The results suggest that the high infection rates of amoebic , amoebic , amoebic and diesparin in the wild rhesus monkeys in southwest China have been widely disseminated . In conclusion , we have found a kind of the human animal co - infection with the amoebas in the colon only in China . In conclusion , the investigation and monitoring of the infection of amoeba in China have the important social significance .

【学位授予单位】：复旦大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2012
【分类号】：R382.1

【共引文献】