重组腺病毒介导人类白细胞抗原-G基因转染恒河猴树突状细胞对T细胞的增殖作用

发布时间：2018-04-04 18:34

  本文选题：人类白细胞抗原-G基因　切入点：T细胞　出处：《医学研究生学报》2017年01期

【摘要】：目的人类白细胞抗原-G(HLA-G)通过与树突状细胞(DC)表面的免疫球蛋白样转录体(ILT2)和ILT4(CD85d)结合,广泛参与机体的免疫耐受的过程。探讨经HLA-G重组腺病毒载体感染后的恒河猴未成熟树突状细胞刺激T细胞的增殖作用。方法麻醉恒河猴获取新鲜骨髓血,采用密度梯度离心法,分离获得的单个核细胞行免疫磁珠法获得CD34+细胞。添加小剂量细胞因子联合诱导分化CD34+细胞,从而获得树突状细胞。介导HLA-G的重组腺病毒经过转染未成熟树突状细胞后,检测病毒感染效率,Western blot检测HLA-G在未成熟树突状细胞中的表达。以恒河猴T细胞作为反应细胞,将介导HLA-G的重组腺病毒转染的不同状态下的DC为刺激细胞,进行混合淋巴细胞实验。设置5组:即成熟树突状细胞组(mDC组);未成熟树突状细胞组(imDC组);imDC(L)组:在第7天成功获得imDC后加入脂多糖100 ng/m L;imDC(V)组:重组腺病毒介导HLA-G感染的imDC,方法同前;imDC(L+V)组:重组腺病毒同样转染imDC,同时在培养过程中添加100ng/m L的脂多糖。根据DC与T细胞不同比例(1∶5、1∶10、1∶20、1∶40)计算各组刺激指数(SI)。结果成功培养获得恒河猴未成熟树突状细胞,HLA-G在该细胞中表达。流式细胞术检测结果发现DC的纯度高达92.3%,imDC组则高达72.39%,CD4+T细胞阳性率纯度80%。混合淋巴细胞实验分析DC刺激T细胞增殖结果表明,不同DC与T细胞比例(1∶5、1∶10、1∶20、1∶40)下,imDC组SI为1.63±0.03、1.52±0.04、1.39±0.03和1.21±0.01;mDC组SI为2.23±0.05、2.01±0.03、1.65±0.02和1.54±0.05;imDC(L)组SI为2.25±0.04、1.96±0.02、1.62±0.03和1.48±0.01;imDC(V)组SI为1.46±0.04、1.33±0.02、1.20±0.04和1.04±0.02;imDC(L+V)组SI为1.67±0.03、1.59±0.04、1.38±0.03和1.24±0.03。与imDC组比较,mDC组、imDC(L)组SI明显增高(P0.01);与imDC(V)组比较,imDC组、mDC组、imDC(L)组、imDC(L+V)组SI明显增高(P0.01);与imDC(L+V)组比较,mDC组、imDC(L)组SI明显增高(P0.01)。结论重组腺病毒介导HLA-G转染的恒河猴未成熟树突状细胞能够有效抑制恒河猴T细胞的增殖。
[Abstract]:Objective Human leukocyte antigen (HLA-GN) binds to immunoglobulin-like transcripts (ILT2) and ILT4 (CD85d) on the surface of dendritic cells (DC) to participate in the process of immune tolerance.To investigate the proliferation of T cells stimulated by immature dendritic cells of rhesus monkey infected with HLA-G recombinant adenovirus vector.Methods fresh bone marrow blood was obtained from anesthetized rhesus monkey and CD34 cells were obtained by density gradient centrifugation.Dendritic cells were obtained by adding low dose cytokines to induce differentiation of CD34 cells.After the recombinant adenovirus mediated HLA-G was transfected into immature dendritic cells, the viral infection efficiency was detected. Western blot was used to detect the expression of HLA-G in immature dendritic cells.The T cells of rhesus monkey were used as reaction cells and DC transfected with recombinant adenovirus of HLA-G was used as stimulator cells to carry out mixed lymphocyte experiment.璁剧疆5缁，

本文编号：1711194