人副流感病毒3型HN蛋白十一肽重复序列保守氨基酸突变分析

发布时间：2018-04-12 00:27

本文选题：人副流感病毒型(hPIV) + 血凝素神经氨酸酶(HN)　；参考：《病毒学报》2017年05期

【摘要】：为确定人副流感病毒3型(Human parainfluenza virus type 3,hPIV3)病毒包膜表面血凝素神经氨酸酶(Hemagglutinin-neuraminidase,HN)糖蛋白茎部区十一肽重复序列中保守氨基酸中具有关键性作用的位点,进一步探讨HN蛋白茎部区在融合机制中的重要作用。结合定点突变和同源重组技术将HN蛋白茎部区十一肽重复序列中5个保守氨基酸位点(I102、P111、L114、S119、I125)突变为丙氨酸(Alanine,A),通过痘苗病毒-T7聚合酶系统在BHK-21细胞中表达突变蛋白,定性定量检测各突变体蛋白的促细胞融合活性、受体结合活性、神经氨酸酶活性和半融合活性。突变体蛋白I102A、P111A、L114A、S119A、I125A的促细胞融合活性均有不同程度下降,依次为野生型的6%、16%、14%、87%和4%,除S119A外其余4个突变型与野生型相比差别均具有统计学意义(P0.01);突变体蛋白I102A、P111A、L114A、S119A、I125A的受体结合活性也出现不同程度下降,依次分别为野生型的32.2%、77.4%、74.2%、83.9%和38.7%,其中I102A和I125A的受体结合活性与野生型相比差别具有统计学意义(P0.01);突变体蛋白I102A、P111A、L114A、S119A、I125A的神经氨酸酶活性分别为野生型的66.5%、73.1%、69.1%、76.1%和72.8%,与野生型相比差别无统计学意义(P0.05)。结果表明:茎部区十一肽重复序列对hPIV3HN蛋白的促细胞融合活性和受体结合活性具有重要意义。该区域氨基酸I102、P111、L114、I125具有关键作用,推测其能通过影响头部区受体结合活性或是与融合蛋白的相互作用等不同方式导致HN蛋白结构功能发生改变。
[Abstract]:In order to identify the key amino acid sites in the stem region of human parainfluenza virus human parainfluenza virus type 3 hPIV3, hemagglutinin-neuraminidase (Hemagglutinin-neuraminidase) hemagglutininin-neuraminidase (HNase) on the envelope of human parainfluenza virus (HPIV3),To further explore the important role of HN protein stem region in fusion mechanism.In combination with site-directed mutagenesis and homologous recombination technique, five conserved amino acid loci of HN protein were transformed into Alanine Alanine Agnin (Alanine Agna), and the mutant protein was expressed by vaccinia virus T7 polymerase system in BHK-21 cells.The cellular fusion activity, receptor binding activity, neuraminidase activity and semi-fusion activity of the mutants were determined qualitatively and quantitatively.The cell fusion activity of mutant protein I102A, P111A, L114Am, S119Afen, I125A, was decreased in varying degrees.The difference was not statistically significant (P 0.05).The results showed that the repeat sequence of undecapeptide in stem region was important to the cellular fusion activity and receptor-binding activity of hPIV3HN protein.The amino acid I102P111P111L114P125 plays a key role in HN protein structure and function changes by affecting the receptor binding activity of the head region or interacting with the fusion protein.
【作者单位】：山东大学公共卫生学院病毒学研究室;山东大学国家糖工程技术研究中心微生物技术国家重点实验室;
【基金】：国家自然科学基金(项目号:81672011),题目:副粘病毒HN蛋白颈部与自身头部、F蛋白的相互作用及机制;国家自然科学基金(项目号:81271806),题目:副粘病毒融合蛋白连接区介导膜融合的分子机制山东大学交叉培育项目(项目号:2015JC044),题目:病毒感染性疾病相关糖链的结构与功能研究~~
【分类号】：R373.13

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