论文一：血管紧张素Ⅱ对树突状细胞和自然杀伤细胞交互作用中白介素-23产生的作用及机制研究 论文二：MicroRNA-29

发布时间：2018-04-25 10:04

  本文选题：血管紧张素Ⅱ + 树突状细胞　； 参考：《浙江大学》2012年博士论文

【摘要】：研究背景： 树突状细胞(DC)和自然杀伤(NK)细胞是机体两大类免疫细胞,与其它免疫细胞共同构成血管相关淋巴组织。DC-NK通过相互作用能加强双方的功能,产生大量的细胞因子促进免疫炎症反应。 白介素-23(IL-23)是近年来发现的IL-12家族新成员,相关的文献研究证明,IL-23参与了动脉粥样硬化的病理生理过程。但是没有相关研究证明DC-NK交互作用是否能产生IL-23。AngⅡ是动脉粥样硬化的危险因素之一,AngⅡ在DC-NK交互作用中的作用亦无相关研究。 目的： 本研究主要探索DC-NK交互作用中IL-23产生及其可能的分子机制,并探讨了AngⅡ对DC-NK交互作用中IL-23产生的影响与可能机制。 方法： 1)从6-8周龄C57/BL6小鼠的骨髓股骨及胫骨获得骨髓单个核细胞,体外培养诱导分化为DC。 2)培养DC6天后,摘取10-12周C57/BL6小鼠的脾脏,获得脾脏单个细胞,用免疫磁珠分选NK细胞。按照2：1的DC/NK细胞比例,将DC与新鲜分离的NK共培养。 3)根据实验分组加入或不加AngⅡ,24小时后留取细胞培养上清,用ELISA检测IL-23产量；用流式细胞仪检测DC成熟表型；或用免疫磁珠将DC与NK分离开,用Western blot检测extracellular signal-regulated kinase (ERK1/2), stress-activated protein kinase/c-Jun N-terminal kinase (JNK)和P38MAPK的磷酸化水平。 4)根据ERK, JNK, P38MAPK活化的情况,在DC里分别预先加入PD98059(ERKl/2inhibitor,50μM), SB-203580(p38MAPK inhibitor,10μM)或SP600125(JNK1/2/3inhibitor,10μM),再与NK和/或AngⅡ培养24小时,检测培养上清中IL-23的含量。 结果： 1) NK细胞能促进DC分泌IL-23,Ang Ⅱ也能促进DC分泌IL-23,但是在DC-NK共培养体系中加入Ang Ⅱ后,IL-23的水平反而有所下降。 2)DC-NK交互作用使DC成熟的表面分子标志表达升高,但AngⅡ对DC-NK交互作用中的DC成熟状态无显著影响。 3) AngⅡ通过磷酸化ERK1/2使DC产生IL-23；NK通过ERK、JNK、P38MAPK途径使DC产生IL-23；但在DC-NK共培养体系中,JNK通路对IL-23的产生起重要作用。 结论： 1)DC-NK交互作用可以产生IL-23。 2) AngⅡ能促进DC产生IL-23,但却减少了DC-NK交互作用中IL-23的产量。 3)不同的MAPK通路参与调节了DC的IL-23产生。 背景： 氧化低密度脂蛋白(oxLDL)在动脉粥样硬化进展中有重要推动作用。既往的研究发现氧化低密度脂蛋白能刺激树突状细胞(DC)启动一系列免疫应。MicroRNA是一类非编码小片段RNA,其功能主要是通过与靶基因的mRNA (messenger RNA)的3’非翻译区(3’UTR)特异相互作用负向调控mRNA的翻译,进而影响细胞分化发育、免疫以及炎症等生理病理过程。对于oxLDL刺激树突状细胞所引起的MicroRNA的变化在国内外研究较少。 本课题组继往研究发现,oxLDL刺激的人外周血来源DC高表达microRNA-29a(miR-29a)。miR-29a是一个被广泛研究的(?)niRNA,它的作用多样而复杂,参与调节许多病理与生理过程。高表达的miR-29a对DC功能有怎样的影响,是否参与oxLDL的致病过程,值得探讨。 目的： 利用oxLDL刺激人外周血来源DC,观察miR-29a对DC的细胞因子IL-12以及趋化因子分泌的影响,并对miR-29a的靶标基因进行验证。 方法： 体外培养诱导分化人外周血来源的DC,分别用miR-29a的模拟物和抑制剂转染DC,然后加入oxLDL培养DC48小时后,检测培养上清趋化因子CCL3和CCL5的表达。分别用荧光定量PCR和蛋白印迹检测靶标基因HSPA14的表达,并用萤火虫素酶报告基因检测验证HSPA14的3’-UTR与miR-29a直接结合。HSPA14的RNA干扰验证了miR-29a对DC细胞因子及趋化因子分泌的负性调控作用。 结果： miR-29a能降低oxLDL刺激的DC表达细胞因子IL-12和趋化因子CCL3、CCL5。荧光定量PCR以及Western-blot证明miR-29a减少了HSPA14的表达。萤火虫素酶报告基因检测验证HSPA14是miR-29a的靶基因。 结论： miR-29a通过抑制靶基因HSPA14来减少oxLDL刺激的DC分泌细胞因子IL-12和趋化因子CCL3、CCL5。
[Abstract]:Research background:
Dendritic cells (DC) and natural killer (NK) cells are two major immune cells in the body, which together form vascular related lymphoid tissue with other immune cells to enhance the function of both sides through interaction and produce a large number of cytokines to promote immune inflammatory response.
Interleukin -23 (IL-23) is a new member of the IL-12 family found in recent years. Related literature studies have shown that IL-23 has been involved in the pathophysiological process of atherosclerosis. However, there is no related research to prove whether DC-NK interaction can produce IL-23.Ang II is one of the risk factors for atherosclerosis, and the role of Ang II in DC-NK interaction There is no related research.
Objective:
This study mainly explores the molecular mechanism of IL-23 production and its possible mechanisms in the interaction of DC-NK, and probes into the effects and possible mechanisms of Ang II on the production of IL-23 in the interaction of DC-NK.
Method锛，

本文编号：1800863