抗人早孕因子单克隆抗体的制备

发布时间：2018-04-25 12:26

  本文选题：早孕因子 + 免疫抑制位点　； 参考：《郑州大学》2011年硕士论文

【摘要】：目的：通过制备缺失免疫抑制位点的人早孕因子重组表达蛋白和合成多肽,生产鉴定抗人早孕因子单克隆抗体。方法：以pMD18T-HSPE1模板,PCR扩增缺失免疫抑制位点的人早孕因子基因片段,经限制性内切酶BamH I和XhoⅠ双酶切后,连接到原核表达载体pGEX-6P-1中,构建重组表达质粒pGEX6P-EPF11。将表达质粒转化大肠杆菌BL21,以0.5 mmol/L IPTG进行诱导表达GST-EPF11融合蛋白,Western blot鉴定。分别以纯化的GST-EPF11融合蛋白和MC29合成多肽为免疫原,免疫Balb/c小鼠,免疫四次,每次免疫间隔时间为三周,四免后测定抗体效价。将小鼠脾细胞与骨髓瘤细胞进行细胞融合,经ELISA筛选与克隆化,生产鉴定单克隆抗体。结果：构建了缺失免疫抑制位点的人早孕因子重组表达载体pGEX6P-EPF11,用0.5 mmol/L IPTG诱导表达GST-EPF11融合蛋白,破碎表达菌体,获取上清,成功获得纯化的GST-EPF11融合蛋白,分子量为35000。GST-EPF11融合蛋白免疫Balb/c小鼠和多肽免疫Balb/c小鼠,四免后测定小鼠效价分别为1：12 800和1：6 400,融合小鼠成功制备并筛选出四株抗人早孕因子单克隆抗体,分别为1E11、2D7、3F8和5G12,效价均在1：3 200以上。结论：在大肠杆菌中成功表达出GST-EPF11融合蛋白,以重组蛋白和合成多肽免疫小鼠,成功制备了抗人早孕因子的单克隆抗体。
[Abstract]:Aim: to produce and identify monoclonal antibody against human early pregnancy factor by preparing recombinant expression protein and synthetic polypeptide of human early pregnancy factor with deletion of immunosuppressive site. Methods: the fragment of human early pregnancy factor gene with deletion of immunosuppressive site was amplified by pMD18T-HSPE1 template. The gene fragment was digested by restriction endonuclease BamH I and Xho 鈪，

本文编号：1801314