醛固酮对人单核巨噬细胞THP-1分泌IL-8的调控研究

发布时间：2018-05-04 15:12

本文选题：醛固酮 + Toll样受体4　；参考：《中国人民解放军军医进修学院》2011年博士论文

【摘要】：背景和目的：醛固酮,作为肾素-血管紧张素-醛固酮系统的一个主要成员,负责调控肾脏、结肠的离子转运,维持水、电解质的平衡。许多研究发现,在严重应激病人的体内肾素-血管紧张素-醛固酮系统被明显激活,血清中醛固酮的水平也明显升高。长久以来,人们认为醛固酮可促进高血压和心肌纤维化的发生,通过促进心肌成纤维细胞增殖和胶原的合成,导致心肌重构和心肌功能低下。醛固酮可发挥经典的基因组作用,通过与细胞内盐皮质激素受体结合,进而影响靶蛋白的转录和合成。但是,研究发现,醛固酮也可通过与细胞膜受体结合发挥非基因组作用,主要特点是作用迅速(数分钟内),不被ALD受体拮抗剂螺内酯所抑制,也有证据显示有些非基因作用方式是由MR介导的,能够部分被螺内酯所抑制。Toll样受体广泛存在于天然免疫细胞膜上,是感知外源性或内源性损伤物质的“哨兵”。应激后,组织受到损伤,细胞应激或者降解导致某些物质释放或者分泌,与Toll样受体4结合后介导一系列的炎性反应。Toll样受体4可识别一系列的内源性识别分子,如高迁移率簇蛋白,透明质烷片段,热休克蛋白,硫酸乙酰肝素和纤维蛋白原等。研究发现严重应激后常引起肾素-血管紧张素-醛固酮系统兴奋,并伴以不同程度的血管紧张素、醛固酮水平上调等,它们可能在一定程度上影响免疫功能。本研究探讨应激后机体神经内分泌系统对免疫识别受体-Toll样受体4信号通路的影响,研究醛固酮调控THP-1细胞分泌IL-8的作用与机制,证实醛固酮通过Toll样受体4调控机体的免疫应答。方法：本实验利用药物干预的方法模拟体内应激状态模型,通过酶联免疫吸附法(enzyme-linked immunosorbent assay, ELISA)动态检测细胞培养上清IL-8的分泌量,确定药物干预的最佳剂量和最佳作用时间,并通过实时荧光定量PCR(polymerase chain reaction)方法观察在给予拮抗剂治疗下,IL-8的mRNA的改变和受体表达的变化,进一步研究醛固酮在应激状态下调控IL-8分泌的信号传导通路及各信号通路之间的相互作用,同时研究醛固酮受体拮抗剂-螺内酯和Toll样受体4单克隆抗体的干预效果。计量资料以均数士标准差(x±s)表示,采用CHISS2007软件对数据进行单因素方差分析(analysis of variance, ANOVA),组间两两比较采用SNK-q(student-newman-keuls,SNK-q)检验,P0.05表示有统计学意义。结果：实时荧光定量PCR和免疫细胞荧光结果显示,人单核巨噬细胞THP-1有盐皮质激素受体和Toll样受体表达。将四个剂量的醛固酮(10nM,102nM、103nM和104nM)与THP-1细胞共孵育5min、30min、2h、6h和12h,以ELISA方法发现醛固酮在2h后可明显上调THP-1细胞IL-8的分泌,四个剂量分别为对照组的1.11,2.28,1.63和1.68倍,并随时间逐渐增高,12h达到高峰；PCR结果显示醛固酮与THP-1细胞共孵育30min后,THP-1细胞IL-8 mRNA的表达为对照组的4.47倍,12h达到高峰。102nM的醛固酮与THP-1细胞孵育12h后,应用终浓度为10μg/μl的TLR4单克隆抗体和10-6M的螺内酯进行干预,其对IL-8 mRNA的表达量均明显降低(P0.05)且TLR4单克隆抗体和螺内酯同时作用,对阻断IL-8的分泌和合成具有协同作用。结论：人单核-巨噬细胞THP-1存在盐皮质激素受体MR和Toll样受体4(TLR4)。醛固酮可呈时间依赖性增加THP-1细胞的IL-8分泌,且这种上调IL-8分泌的作用不是通过非基因组途径,而是通过经典的MR受体介导的,且可被MR的特异性受体拮抗剂螺内酯阻断。醛固酮刺激THP-1细胞分泌IL-8,也可被TLR4的单克隆抗体部分阻断。螺内酯和TLR4的单克隆抗体对于ALD刺激THP-1细胞分泌IL-8的阻断具有协同作用。醛固酮可以通过上调TLR4受体的蛋白表达水平,参与对机体的免疫调控机制。
[Abstract]:Background and Purpose :

Toll - like receptor 4 can play an important role in the pathogenesis of hypertension and myocardial fibrosis .

Method :

The effects of aldosterone receptor antagonist - spirolactone and Toll - like receptor 4 monoclonal antibody were studied by means of real - time fluorescence quantitative polymerase chain reaction ( CHISS2007 ) .

Results :

Four doses of aldosterone ( 10 nM , 102 nM , 103 nM and 104 nM ) were incubated with THP - 1 cells for 5 min , 30 min , 2 h , 6 h and 12 h . Four doses of aldosterone ( 10 nM , 102 nM , 103 nM and 104 nM ) were incubated with THP - 1 cells for 5 min , 30 min , 2 h , 6 h and 12 h .
After 30 min incubation with THP - 1 cells , the expression of IL - 8 mRNA in THP - 1 cells was 4.47 times and peaked at 12 h . After 12 hours of incubation with THP - 1 cells , the expression of IL - 8 mRNA decreased significantly ( P0.05 ) .

Conclusion :

Aldosterone stimulates the secretion of IL - 8 in THP - 1 cells in a time - dependent manner .

【学位授予单位】：中国人民解放军军医进修学院
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2011
【分类号】：R392.3

【参考文献】