siRNA分子干扰铜绿假单胞菌MexAB-OprM外排泵MexB基因表达的效应研究

发布时间：2018-05-12 08:22

  本文选题：siRNA + 铜绿假单胞菌　； 参考：《华中科技大学》2012年博士论文

【摘要】：目的：MexAB-OprM外排泵系统在铜绿假单胞菌固有耐药中起着重要的作用,本研究旨在探讨RNA分子干扰铜绿假单胞菌MexAB-OprM外排泵MexB基因的效应；观察铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa, PA01)野生株和MexAB-OprM外排泵变异菌株对小鼠致病性的差异。 方法：设计并合成2条21bp小分子干扰RNA(small interfering RNA, siRNA)序列,构建干扰RNA表达载体,将带有siRNA质粒的电转入PAO1。应用E-test方法检测PAO1相应抗生素MIC的变化;RT-PCR法检测Me.xB的mRNA的表达变化。建立铜绿假单胞菌小鼠肺部感染的模型观察siRNA干扰MexB基因的效应,分别于感染后1d,2d和3d给小鼠腹腔注射美罗培南(meropenem 100mg/kg,2次/d)。观察各组小鼠肺大体和镜下病理改变情况,细菌计数,检测支气管肺泡灌洗液(BALF)中白介素-1b(IL-1b)和白介素-12(IL—12)表达水平,并检测肺组织髓过氧化物酶(MPO)表达水平。同时建立铜绿假单胞菌野生株K767,铜绿假单胞菌MexAB-OprM高表达(nalB)和MexAB-OprM敲除株(△mexB)小鼠肺部感染模型,并于感染后1,2和3d应用美罗培南(meropenem 100mg/kg,2次/d)治疗小鼠,治疗后第3d,7d,14d进行各组小鼠各项指标观察。 结果：MIC结果显示siRNA能明显提高PAO1对抗生素的敏感性。RT-PCR结果显示siRNA干扰后的PA01MexB基因表达明显下降(p0.05)。siRNA干扰组小鼠,感染后3d,5d,7d肺部细菌负荷明显下降。相对于siRNAnon (PA01)组和Scrambled siRNA(阴性分子对照)组,siRNA组小鼠肺部病理学改变明显减轻。siRNA干扰组在感染早期(3d),中性粒细胞的募集(MPO)和炎性细胞因子(IL-1b和IL-12)升高,在感染后期(7d)上述因子表达水平下降。MexAB-OprM外排泵变异小鼠感染模型的结果显示,相比于K767和nalB组,在感染早期(3d),ΔmexB组中性粒细胞的募集(MPO)升高,在感染后期(14d)炎性细胞因子表达水平下降。各组血清巨噬细胞炎症蛋白-2(MIP-2)的水平在感染期间均持续升高,ΔmexB组与K767和nalB组相比,组间差异显著,p0.05。ΔmexB组细菌载量在感染后7,14d下降明显,同时ΔmexB组具有明显减轻的病理学改变。与K767和nalB组相比,在感染早期(3d),ΔmexB组中性粒细胞的募集(MPI)和炎性细胞因子(IL-1b,IL-12和TNF-a)水平明显升高,在感染后期(14d),MPO和细胞因子表达水平明显下降。三组血清巨噬细胞炎症蛋白-2(MIP-2)的水平在感染期间均持续升高,ΔmexB组与K767和nalB组相比,组间差异显著,p0.05。 结论：siRNA可以同时抑制(?)MexAB-OprM外排泵MexB基因的表达和提高铜绿假单胞菌对抗生素的敏感性。体内研究显示,siRNA能有效减少小鼠慢性肺部感染的细菌载量,说明以MexB为靶基因设计的siRNA分子能控制铜绿假单胞菌所致的感染。本研究为慢性铜绿假单胞菌肺部感染的治疗提供了新的思路。此外,MexAB-OprM外排泵缺陷菌株ΔmexB组的肺部病变明显轻于nalB组,表明MexAB-OprM外排泵系统在铜绿假单胞菌慢性肺部感染发生发展中起到重要作用。
[Abstract]:Objective : To investigate the effect of RNA molecules on the resistance of Pseudomonas aeruginosa ( Pseudomonas aeruginosa ) to Pseudomonas aeruginosa ( Pseudomonas aeruginosa ) .
The pathogenicity of Pseudomonas aeruginosa ( PA01 ) wild strain was observed in mice .
Methods : Two 21bp small interfering RNA ( siRNA ) sequences were designed and synthesized . The interfering RNA expression vector was constructed . The expression of MIC of PAO1 was detected by E - test . The effect of siRNA on the mRNA expression of ME.xB was detected by RT - PCR . The expression level of interleukin - 1b ( IL - 1b ) and interleukin - 12 ( IL - 12 ) in BALF were measured and the expression level of myeloperoxidase ( MPO ) in lung tissues was detected .
Results : The results showed that siRNA could significantly increase the sensitivity of PAO1 to antibiotics . Compared with group K767 and nalB , the level of TNF - a decreased significantly after infection .
Conclusion : siRNA can inhibit the expression and the sensitivity of Pseudomonas aeruginosa to antibiotics at the same time . In vivo studies show that siRNA can effectively reduce the bacterial load of chronic pulmonary infection in mice .

【学位授予单位】：华中科技大学
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2012
【分类号】：R378

【参考文献】

相关期刊论文 前1条

1 王文敏;徐志豪;;铜绿假单胞菌生物被膜形成的调控及治疗对策研究进展[J];浙江大学学报(医学版);2010年01期

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本文编号：1877866