个旧矿粉诱导的大鼠肺泡Ⅱ型上皮与肺成纤维细胞共培养相互作用的研究

发布时间：2018-05-14 11:34

  本文选题：肺泡Ⅱ型上皮细胞 + 肺成纤维细胞　； 参考：《昆明医学院》2011年硕士论文

【摘要】：[目的]通过构建矿粉诱导永生化大鼠肺泡Ⅱ型上皮转化过程中与大鼠肺成纤维细胞相互作用的细胞共培养模型,探讨肺成纤维细胞作为肿瘤基质成纤维细胞在肺泡Ⅱ型上皮细胞转化中的作用。 [方法] (1)选用200μg/ml个旧锡矿矿粉,分别对永生化大鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞(RLE-6TN)及永生化大鼠肺成纤维细胞(RFL-6)染毒,每次染毒72h,隔代染毒直至第20代,自第21代起分组共培养至第40代。(2)倒置显微镜观察活细胞形态。(3)电镜观察肺泡Ⅱ型上皮细胞染毒前后超微结构改变。(4)流式细胞仪分析细胞周期变化。(5)刀豆凝集素实验。(6)锚着独立性生长实验检测上皮细胞恶性转化。(7)免疫细胞化学检测肺泡Ⅱ型上皮细胞高分子角蛋白改变、SP-B改变,成纤维细胞活化标志α-SMA、以及上皮细胞恶性转化标志FHIT和Ki-67。(8)免疫印迹检测肺泡Ⅱ型上皮细SP-C改变。 [结果] (1)经过个旧锡矿粉矿粉20代隔代染毒后,肺泡Ⅱ型上皮细胞细胞形态发生变化,超微结构改变,板层小体消失；SP-B、SP-C表达下降,但各项恶性转化指标均为阴性；成纤细胞活化标志α-SMA阳性,说明其已被活化。(2)经过20代共培养,发现染毒肺泡Ⅱ型上皮细胞细胞形态进一步改变,近似于恶性细胞；刀豆凝集素实验、锚着独立性生长实验均为阳性；FHIT表达逐步下降而Ki-67表达趋于增强,其中与染毒成纤维细胞共培养组表现更为显著,差异具有统计学意义。(3)未染毒肺泡Ⅱ型上皮细胞与肺成纤维细胞共培养后,未见显著差异。(4)活化后的肺成纤维细胞经与染毒肺泡Ⅱ型上皮细胞共培养其α-SMA表达较对照组增强,差异具有统计学意义。 [结论] (1)单纯以200ug/ml矿粉作用20代,不足以使RLE-6TN细胞发生恶性转化,而与矿粉作用的成纤维细胞共培养能促使上皮细胞发生恶性转化。(2)在矿粉诱导RLE-6TN上皮细胞恶性转化的过程中存在FHIT蛋白的丢失,并伴随Ki-67的表达增高,且这一现象能被成纤维细胞所促进。(3)矿粉诱导可导致RLE-6TN上皮细胞的增殖活性增强、Ki-67高表达,与成纤维细胞共培养后,增殖活性的升高尤为明显。(4)200ug/ml矿粉能诱导成纤维细胞RFL-6活化,继而表达α-SMA,其活化能被经矿粉作用的上皮细胞所促进。
[Abstract]:Objective : To investigate the role of lung fibroblasts as tumor stromal fibroblasts in the transformation of alveolar type II epithelial cells by constructing a cell co - culture model of the interaction between lung fibroblasts in rat alveolar type II epithelial cells induced by mineral powder .

The changes of cell cycle of alveolar type 鈪，

本文编号：1887695