整合素β1、TNF-α在成骨细胞凋亡及NO代谢的作用关系

发布时间：2018-05-15 02:27

  本文选题：成骨细胞 + TNF-α　； 参考：《第二军医大学》2012年硕士论文

【摘要】：目的：肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α, TNF-α)是一类炎症因子，整合素β1是存在于细胞膜上的一中跨膜信号分子，一氧化氮（nitric oxide, NO）是一种短效自由基，这三种物质在细胞活动中发挥不同的生物作用。我们的实验目的是了解TNF-α在成骨细胞活性、凋亡、整合素β1表达、NO代谢中的作用以及TNF-α与整合素β1对成骨细胞凋亡和NO代谢的影响。 方法： 1.运用小鼠颅盖骨原代培养鉴定和传代的方法获得生长状态良好的成骨细胞。 2.将TNF-α与α-MEM培养基配成混悬液，按0μg/L、10μg/L、50μg/L、100μg/L的TNF-α浓度与成骨细胞共培养，按时间段分为24h和48h组。 3.按TNF-α浓度梯度和时间组用酶标仪检测成骨细胞活性和碱性磷酸酶(alkalinephosphatase,ALP)活性。 4.按TNF-α浓度梯度和时间组采用流式细胞仪检测成骨细胞整合素β1的表达和凋亡，按格里思法检测氧化氮的代谢产物——亚硝酸根离子（NO_2~-），代表NO的浓度。 5.使用整合素封闭剂封闭整合素β1，按TNF-α浓度梯度检测成骨细胞凋亡，研究整合素和TNF-α的交互作用。 结果： 1.实验获得的成骨细胞在3代时生长状态稳定。成骨细胞进行骨结节诱导和染色后，出现钙化的骨结节。细胞活性较好适宜进行药物实验。 2.随着TNF-α浓度的升高和培养时间的延长，成骨细胞活性和碱性磷酸酶活性减低，凋亡增多。 3.48h，，TNF-α的浓度为10μg/L时NO_2~-含量达最大值；培养时间的延长NO_2~-的代谢含量维持在一个较高的浓度，与对照组有显著性差异(P＜0.01)。 4.随着TNF-α浓度的升高和培养时间的延长，成骨细胞整合素β1表达减少。 5.整合素β1封闭后，共培养的TNF-α浓度的升高，成骨细胞凋亡较未封闭组增多；NO_2~-的浓度较未封闭组无明显变化。 结论： 1. TNF-α可以降低成骨细胞活性和碱性磷酸酶活性，且具有一定的时间和浓度依赖性。 2.单一的TNF-α可以促进成骨细胞NO的代谢和释放，48h，TNF-α的浓度为10μg/L时，呈峰值表达；TNF-α可以诱导成骨细胞凋亡。整合素β1对成骨细胞NO代谢无明显相关性。 3.成骨细胞在培养过程中，整合素β1的表达呈阳性。高浓度TNF-α能够抑制成骨细胞整合素β1的表达，具有浓度和时间依赖性。在诱导成骨细胞凋亡，整合素β1和TNF-α具有拮抗作用。
[Abstract]:Objective: tumor necrosis factor- 伪 (TNF- 伪) is a kind of inflammatory factor, integrin 尾 1 is a transmembrane signaling molecule in cell membrane, nitric oxide (no) is a kind of short-acting free radical. These three substances play different biological roles in cell activity. Our aim was to investigate the role of TNF- 伪 in osteoblast activity, apoptosis, integrin 尾 1 expression and no metabolism, and the effects of TNF- 伪 and integrin 尾 1 on osteoblast apoptosis and no metabolism. Methods: 1. Osteoblasts with good growth state were obtained by primary culture and subculture of mouse calvaria. 2. TNF- 伪 was mixed with 伪 -MEM medium to form suspension. TNF- 伪 was co-cultured with 100 渭 g / L TNF- 伪 at the concentration of 10 渭 g / L ~ 10 渭 g / L ~ (10) 渭 g 路L ~ (-1) and divided into 24 h and 48 h groups. 3. The activity of osteoblasts and alkaline phosphatase (ALP) were measured by enzyme labeling instrument according to TNF- 伪 concentration gradient and time group. 4. The expression and apoptosis of integrin 尾 1 in osteoblasts were detected by flow cytometry according to TNF- 伪 concentration gradient and time group. Nitrite ion, the metabolite of nitrogen oxide, was used to detect the expression and apoptosis of integrin 尾 1 in osteoblasts. 5. Using integrin sealant to block integrin 尾 1, osteoblast apoptosis was detected according to TNF- 伪 concentration gradient, and the interaction between integrin and TNF- 伪 was studied. Results: 1. The growth state of osteoblasts was stable at the third passage. After osteoblasts were induced and stained with bone nodules, calcified bone nodules appeared. Good cell activity is suitable for drug experiment. 2. With the increase of TNF- 伪 concentration and the prolongation of culture time, osteoblast activity and alkaline phosphatase activity decreased and apoptosis increased. When the concentration of TNF- 伪 was 10 渭 g / L at 3.48 h, the content of NO2- was the highest, and the metabolic content of NO2- was maintained at a higher concentration when the culture time was prolonged (P < 0.01). 4. With the increase of TNF- 伪 concentration and the prolongation of culture time, the expression of integrin 尾 1 in osteoblasts decreased. 5. After integrin 尾 1 was blocked, the concentration of TNF- 伪 in co-cultured cells increased, and the apoptosis of osteoblasts increased compared with the unblocked group. Conclusion: 1. TNF- 伪 decreased osteoblast activity and alkaline phosphatase activity in a time and concentration dependent manner. 2. When the concentration of TNF- 伪 was 10 渭 g / L, the peak expression of TNF- 伪 could induce apoptosis of osteoblasts. There was no significant correlation between integrin 尾 1 and no metabolism in osteoblasts. 3. The expression of integrin 尾 1 was positive in osteoblasts. High concentration of TNF- 伪 inhibited the expression of integrin 尾 1 in osteoblasts in a concentration and time dependent manner. Integrin 尾 1 and TNF- 伪 have antagonistic effects on osteoblast apoptosis.
【学位授予单位】：第二军医大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2012
【分类号】：R363

【共引文献】

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本文编号：1890568