小鼠PD-1胞外段重组蛋白表达及其包涵体复性

发布时间：2018-05-16 01:46

  本文选题：PD- + 原核表达载体　； 参考：《郑州大学学报(理学版)》2017年02期

【摘要】：旨在利用原核表达系统制备可溶性的PD-1胞外段(以下简称exPD-1)蛋白.以C57BL/6小鼠脾细胞cDNA为模板,扩增小鼠exPD-1基因,成功构建重组质粒pET-28a-exPD-1,并在E.coliBL21(DE3)中诱导表达.结果显示,小鼠exPD-1重组蛋白大小约为17kD,以包涵体形式存在.exPD-1包涵体蛋白经8mol/L尿素变性、Ni-NTA亲和层析后,采用尿素梯度透析法对蛋白进行复性,复性效果不佳,添加氧化/还原型谷胱甘肽复性后,复性率达到50%以上,提高了复性效率.小鼠exPD-1蛋白的成功制备,为进一步研究PD-1的免疫学功能奠定了材料基础.
[Abstract]:The aim of this study was to prepare soluble PD-1 extracellular domain (exPD-1) protein by prokaryotic expression system. The mouse exPD-1 gene was amplified by using cDNA of C57BL/6 mouse spleen cells as template, and the recombinant plasmid pET-28a-exPD-1 was successfully constructed and expressed in E. coli BL21 (DE3). The results showed that the size of mouse exPD-1 recombinant protein was about 17kD.ExPD-1 inclusion body protein existed in the form of inclusion body after 8mol/L urea denaturation Ni-NTA affinity chromatography, the protein was renatured by urea gradient dialysis, and the renaturation effect was not good. After refolding with oxidized / reduced glutathione, the renaturation rate was more than 50%, and the renaturation efficiency was improved. The successful preparation of mouse exPD-1 protein laid a material foundation for further study on the immunological function of PD-1.
【作者单位】： 郑州大学生命科学学院;
【基金】：重大新药创制科技重大专项(2012ZX09103301-022) 国家自然科学基金项目(U1204817,81373119)
【分类号】：R392;Q78

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本文编号：1894910