Ⅱ型单纯疱疹病毒糖蛋白D的表达、纯化、结晶以及结构解析

发布时间：2018-05-17 05:31

  本文选题：Ⅱ型疱疹病毒 + 病毒入侵机制　； 参考：《安徽农业大学》2011年硕士论文

【摘要】：疱疹病毒是一种常见病原微生物，在自然界中能感染众多宿主。单纯疱疹病毒（Herpes simplex virus type， HSV）是疱疹病毒科α亚科，其复制周期短，繁殖速度快。根据血清型分类，HSV分为两个种类，分别是I型单纯疱疹病毒（HSV-1）和Ⅱ型单纯疱疹病毒（HSV-2）。HSV-1易感染人的口腔以及眼上皮细胞，导致口腔疱疹、单纯疱疹病毒性角膜炎等疾病。HSV-2则主要感染人的生殖系统，引起生殖器疱疹。该性病的发病率仅次于淋病和梅毒。HSV-1和HSV-2均能潜伏感染神经细胞。 不论是HSV-1还是HSV-2，单纯疱疹病毒感染细胞都离不开三个过程：粘附、受体结合、融合。在这三个过程中，HSV囊膜上的糖蛋白起到了重要作用。gC和gB与受体结合后使得病毒的囊膜和细胞的脂质膜靠近，从而病毒粘附在细胞上。gD与nectin-1/nectin-2、HVEM、3-O-硫酸乙酰肝素、gB与PILRα、Non-muscle myosin ⅡA进行受体识别和结合。之后形成的gD、gB、gH和gL的四元复合物引发膜融合。 其中gD在病毒与宿主细胞的膜融合过程中作用关键。根据已经解析的HSV-1gD以及其与受体HVEM的复合体的结构发现，gD的C端回折缠绕在N端的受体结合位点，但当受体结合时，C端让出该结合位点。而C端与gB、gH和gL形成融合符合物。 由于HSV-1和HSV-2二者感染的细胞不同，并且不同株系病毒的囊膜蛋白gD选择的受体也有所不同。为了了解HSV-1gD和HSV-2gD在受体选择上的差异，需要进一步研究这两种蛋白与其受体结合的细节。而目前所得到的gD蛋白结构仅是HSV-1KOS株的gD（1-259）、（1-306）以及与HVEM的复合物结构，并没有HSV-2gD的结构。 故在本文中利用杆状病毒表达系统表达出HSV-2stain333的gD蛋白的胞外部分区域（1-285aa），经过Ni-NTA亲和层析以及分子排阻层析纯化后，浓缩至5mg/ml和10mg/ml，，进行悬滴气相扩散法筛选蛋白晶体的生长条件，并得到初筛的晶体。在初筛的晶体生长条件下进行优化。优化后的晶体生长条件为0.1M Hepes pH7.2,5%(v/v) MPD，10%PEG10000，18o C。经过X-射线衍射后，得到了分辨率为1.8的一套晶体衍射数据。分析后的数据显示晶体属于P21空间群，晶胞参数为a=63.6, b=55.4, c=65.3, β=96.3°。
[Abstract]:Herpesvirus is a common pathogenic microorganism that can infect many hosts in nature. Herpes simplex virus type, HSV) is a subfamily of herpes viridae. According to the serotype classification, HSV can be divided into two types: type I herpes simplex virus (HSV-1) and herpes simplex virus type II (HSV-2A). HSV-1 is susceptible to infection of human oral and ocular epithelial cells, leading to oral herpes. Herpes simplex virus keratitis and other diseases. HSV-2 is mainly infected with the human reproductive system, causing genital herpes. The incidence of STDs is second only to gonorrhea and syphilis. HSV-1 and HSV-2 can potentially infect nerve cells. Whether HSV-1 or HSV-2, herpes simplex virus infection can not be separated from three processes: adhesion, receptor binding, and fusion. In these three processes, glycoproteins on HSV capsule play an important role. GC and GB bind to the receptor to make the envelope of the virus and the lipid membrane of the cells close to each other. Therefore, the virus adheres to the cells. GD and nectin-1 / 1 / nectin-2 HVEMN 3-O- heparin sulfate (heparin) B and PILR 伪 Non-muscle myosin 鈪

本文编号：1900138