日本血吸虫尼克酰胺磷酸核糖转移酶及白介素-16的克

发布时间：2018-05-22 18:33

本文选题：日本血吸虫 + 尼克酰胺磷酸核糖转移酶　；参考：《南昌大学》2011年硕士论文

【摘要】：血吸虫病是一种严重危害人体健康和阻碍社会经济发展的人畜共患寄生虫病。控制日本血吸虫病流行仍然是我国亟待解决的公共卫生问题之一。由于采用反复大规模吡喹酮化疗并不能阻止血吸虫重复感染,且有可能产生抗药性等问题,因而,疫苗作为长期有效的血吸虫病防治可能措施而倍受关注,有关的研制努力近年十分活跃。随着日本血吸虫基因组草图的完成,血吸虫疫苗研究进入了后基因组时代,已获得了虫体不同发育阶段及性别相关的基因表达和蛋白表达谱的大量数据。这些数据有助于全面认识和理解血吸虫的生长发育、宿主与血吸虫的相互作用、免疫逃避以及潜在疫苗候选抗原。迄今,一些有希望的日本血吸虫疫苗候选抗原已经获得了克隆和表达。但动物实验结果表明,这些候选抗原的保护效果并不理想,减虫率一般在20%-40%,减卵率在30%-70%,保护率较低,尚不能满足血吸虫病实际防治的需要。因此有必要进一步发掘新的疫苗候选抗原分子。尼克酰胺磷酸核糖转移酶(NAMPT),又称为前B细胞增强因子(PBEF),是尼克酰胺腺嘌呤二核苷酸(NAD)补救合成途径的限速酶,催化底物尼克酰胺转变为中间产物尼克酰胺腺嘌呤单核苷酸(NMN),后者在尼克酰胺腺嘌呤单核苷酸腺苷酰基转移酶的作用下生成终产物NAD。NAD是细胞氧化还原反应经典辅酶,具有广泛的生物学功能。另外,NAMPT(?)能够调节细胞生长、增值和分化,促进细胞对葡萄糖的摄取,具有类胰岛素功能。白介素16(IL-16)因可以诱导人和大鼠CD4+T细胞游走应答,又称为淋巴细胞趋化因子(lymphocyte chemoattractant factor, LCF),IL-16前体无生物学活性,在胞浆中由Caspase酶加工为分泌性的IL-16单体,并以非共价方式结合为四聚体结构,从而具有了刺激细胞增殖、生长、分化以及抑制HIV复制的生物学活性。日本血吸虫尼克酰胺磷酸核糖转移酶(SjNAMPT)基因和白介素16(SjIL-16)基因是日本血吸虫基因组研究中发现的2种新基因。迄今为止,国内外对SjNAMPT及SjIL-16的相关研究未见报道。本研究以寻找新的疫苗候选抗原为目的,根据SjNAMPT基因和SjIL-16基因序列,采用生物信息学方法预测其编码蛋白的基本结构和功能,并设计引物,以日本血吸虫成虫cDNA为模板,PCR扩增目的基因,将其克隆到原核表达载体pET8a中,转化大肠杆菌BL21,IPTG诱导表达,表达产物通过镍柱亲和层析纯化,通过免疫印迹技术检测纯化蛋白的免疫原性,初步分析了SjNAMPT基因和SjIL-16基因在日本血吸虫不同发育阶段的转录水平,并通过ELISA和免疫保护性实验来评价SjNAMPT和SjIL-16蛋白的诊断效能和免疫保护效果。本研究在原核表达系统中成功克隆表达了SjNAMPT和SjIL-16基因,获得了以不可溶包涵体形式表达的纯化蛋白。转录特异性研究表明：SjNAMPT基因和SjIL-16基因都是虫期特异性表达基因。SjNAMPT基因在虫卵和雌虫中不转录,在毛蚴、胞蚴、尾蚴、童虫、合抱成虫,雄虫中转录水平较高,其在雌虫,雄虫阶段转录差异表明该基因可能是性别差异基因。SjIL-16基因在血吸虫发育初期阶段不转录或低转录,而在进入终宿主后的童虫,雄虫和合抱成虫阶段中高水平转录,表明该基因的转录可能受到日本血吸虫发育机制的调节,并有可能与终宿主体内日本血吸虫的发育、分化或宿主依赖性有关。此外,SjIL-16在雌虫个体和雄虫个体的转录差异说明该基因也可能是性别差异基因。免疫原性分析显示：SjNAMPT(?)(?)SjIL-16蛋白都具有一定的免疫原性,可作为疫苗的候选抗原。采用酶联免疫吸附试验法(ELISA)检测血吸虫病人血清中的抗体,SjNAMPT(?)(?)SjIL-16蛋白的敏感性分别为56.0%和60.0%,特异性分别为94.4%和95.4%。 SjNAMPT和SjIL-16蛋白免疫C57/BL6雌性小鼠,减虫率分别为19.5%和20.7%,粪减卵率分别为24.0%和18.5%,与佐剂组相比,差异具有显著性,说明SjNAMPT和SjIL-16蛋白作为候选疫苗分子可诱导小鼠产生部分保护效果。
[Abstract]:......
【学位授予单位】：南昌大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2011
【分类号】：R392

【参考文献】