通过激活和抑制EPCs的CMA探讨CMA和大自噬相互关系的实验研究

发布时间：2018-05-24 08:52

  本文选题：内皮祖细胞 + 大自噬　； 参考：《苏州大学》2012年硕士论文

【摘要】：目的：分别应用SB203580（吡啶异咪哒唑化合物）和6-AN（6-aminonicotinamide）作用于内皮祖细胞（endothelial progenitor cells EPCs）,观察大自噬标记物LC3-Ⅱ和分子伴侣介导自噬（CMA）的标记物LAMP-2A的变化情况，探讨CMA与大自噬的关系。 方法：1.密度梯度离心法分离SD大鼠的骨髓单个核细胞（bone marrow-derivedmononuclear cells, BMMNCs），EGM-2MV培养基诱导、培养、扩增骨髓源性EPCs并鉴定。倒置显微镜观察、MTT法检测EPCs增殖情况。2.在EPCs中加入不同浓度的SB203580（2.5uM、5.0uM、10uM、20uM、40uM）和6-AN（2.5mM、5.0mM、10mM、20mM、40mM），分别作用24小时。以MTT法观察药物对EPCs增殖的影响；FCM检测细胞凋亡情况；Western blot检测LC3-Ⅱ和LAMP-2A蛋白的表达情况；激光共聚焦观察细胞内LAMP-2A的变化。均数以（x±s）表示，采用单因素方差分析各组均数，（P＜0.05）有统计学意义，（P＞0.05）无统计学意义。 结果：1.Ficoll法分离的大鼠骨髓单个核细胞，经EGM-2MV培养基培养可在体外诱导分化为EPCs。2.SB203580在浓度为2.5uM时对EPCs增殖抑制作用不明显，5.0uM及以上时抑制作用较显著（P＜0.05）；6-AN浓度在2.5mM时对EPCs增殖促进作用不明显，5.0mM及以上浓度时有明显促进作用（P＜0.05）。3.SB203580在2.5uM时，细胞凋亡较少，5.0uM及以上时凋亡逐渐增多；6-AN各浓度组凋亡逐渐降低，，在40mM时凋亡增高。4. SB203580各浓度组LC3-II蛋白呈逐渐增高趋势，Lamp-2a呈逐渐降低趋势。6-AN各浓度组LC3-II表达逐渐降低，Lamp-2a表达逐渐升高，但在40mM时两者表达均下调。5.激光共聚焦观察细胞内Lamp-2a的变化情况，6-AN组较SB203580组表现出胞浆内荧光明显的增强。 结论：SB203580抑制EPCs的CMA后，大自噬增强，一定程度上抑制细胞增殖，促进其凋亡；6-AN激活CMA，大自噬表现一定程度的下调，细胞凋亡减少。CMA和大自噬之间表现出功能互补的现象，共同维持细胞功能的稳定。
[Abstract]:Aim: to observe the effects of SB203580 (pyridine isomidazole compound) and 6-ANP 6-aminotinamide on endothelial progenitor cells EPCsN in endothelial progenitor cells (EPCs), and to investigate the relationship between CMA and autophagy by observing the changes of LC3- 鈪

本文编号：1928446