中国碳青霉烯耐药鲍曼不动杆菌多位点序列分型及OXA酶分布研究

发布时间：2018-06-01 07:28

  本文选题：鲍曼不动杆菌 + 多位点序列分型　； 参考：《浙江大学》2012年博士论文

【摘要】：碳青霉烯类(Carbapenem)抗生素是治疗由鲍曼不动杆菌(Acinetobacter baumannii)引发感染最重要的B-内酰胺类(β-lactam)抗生素之一。而碳青霉烯类抗生素耐药鲍曼不动杆菌在我国各地的广泛流行,给临床治疗与抗生素的选择带来极大的困难。为了制定科学、有效的防控措施,通常采用各种分子分型方法,对其进行分子流行病学研究并明确流行趋势,为进一步探究鲍曼不动杆菌的耐药机制提供基础。 本研究于2009年1月至2010年12月期间在全国23个省市的64家医院收集2197株非重复的鲍曼不动杆菌,并选择12种常见抗菌药物开展体外药物敏感性试验。根据药敏结果,对筛选出的808株碳青霉烯耐药鲍曼不动杆菌应用多位点序列分型(Multilocus sequence typing, MLST)方法进行分子流行病学研究；借助. Linux服务器、DNA序列拼接与比对工具编写Perl脚本,实现对各等位基因测序数据的批量处理,并鉴定出等位基因型(Allele type)与序列型(Sequence type,ST)；应用eBURST软件与Bionumerics软件对MLST数据进行聚类分析,预测各菌株间的进化关系。 体外药物敏感性试验结果显示,所有鲍曼不动杆菌对12种临床常用抗生素的平均耐药率为50%～60%,而米诺环素仅有11.56%。MLST结果显示,碳青霉烯耐药鲍曼不动杆菌的遗传背景相对单一,共分为40个ST型(包括17个已被PubMLST数据库收录及23个新发现的ST型),其中ST92及其单位点变异型(Single locus variant, SLV) ST138、ST75与ST381为最主要流行的ST型。应用eBURST软件与Bionumerics软件分析MLST数据,发现当前中国最广泛流行的鲍曼不动杆菌克隆复合体(Clonal complex, CC)为CC92,该克隆复合体包括ST92、 ST138、ST75等ST型。本研究中的体外药物敏感性试验结果也表明,属于CC92的菌株较其他ST型菌株具有更高的耐药率。 上述研究结果表明,CC92是鲍曼不动杆菌流行最广的克隆复合体,它在我国分布广泛且传播迅速,常伴随多重耐药鲍曼不动杆菌的播散与流行。因此,CC92在我国的大范围流行是导致鲍曼不动杆菌对多种抗菌药物耐药率迅速上升的重要原因。 具有碳青霉烯类抗生素水解能力的D类β-内酰胺酶Carbapenem-hydrolyzing class D β-lactamases, CHDLs)是不动杆菌(Acinetobacter spp.)最常见的碳青霉烯酶,常介导其对碳青霉烯类抗生素耐药。本研究主要应用分子生物学手段,探讨5种常见编码CHDLs的OXA耐药基因在不动杆菌中的分布与耐药表型、传播机制之间的关系。 本研究对收集于2009年1月至2010年12月期间全国23个省市64家医院分离的2880株不动杆菌开展体外药物敏感性试验,测定其对12种抗菌药物的最小抑菌浓度(minimum inhibitory concentration, MIC);并应用PCR扩增与测序技术,对筛选出携带blaOXA-51-like、blaOXA-23-like、blaOXA-24-like、blaOXA-25-like与blaOXA-143-like基因的不动杆菌进行菌种鉴定；应用脉冲场凝胶电泳(Pulsed-field gel electrophoresis, PFGE)与Southern杂交确定OXA基因的定位；应用质粒抽提与电转化确定携带OXA基因质粒的可传播性。 体外药物敏感性试验结果显示,不动杆菌对碳青霉烯类抗生素的耐药率约为50%。多重PCR结果显示,携带blaOXA-51-like基因与blaOXA-23-like基因的不动杆菌分别占76.3%与45.7%。而44.9%的不动杆菌同时携带blaOXA-51-like基因与blaOXA-23-like基因,高达95%携带blaOXA-23-like基因的不动杆菌对碳青霉烯类抗生素耐药。此外,筛查发现携带blaOXA-24-like基因、blaOXA-58-like基因与blaOXA-143-like基因的不动杆菌分别为11株、32株与1株。Southern杂交结果显示,携带blaOXA-24-like基因与blaOXA-58-like基因由质粒编码,其质粒可通过电转化的方法导入受体菌,并使受体菌对碳青霉烯类抗生素的MIC值升高。而blaOXA-143-like基因无法通过上述方法检测到,提示该基因可能位于染色体上。
[Abstract]:Carbapenem antibiotics are one of the most important antibiotic - resistant B - lactam antibiotics .

In this study , 2197 non - repetitive acinetobacter baumandii were collected from 64 hospitals in 23 provinces from January 2009 to December 2010 .
with the help of . Linux server , DNA sequence splicing and comparison with Perl script , realize batch processing of sequencing data of each allele , and identify Allele type and sequence type ( ST ) ;
The EBURST software and Bionumerics software were used to cluster the MLST data to predict the evolutionary relationship among the strains .

The results of drug susceptibility test in vitro showed that the average drug resistance rate of all kinds of clinically common antibiotics was 50 % 锝，

本文编号：1963368