稳定分泌抗牛γ-干扰素杂交瘤细胞株的建立与鉴定
本文选题：牛IFN-γ + 单克隆抗体 ； 参考：《东北农业大学》2011年硕士论文
【摘要】：γ-干扰素(IFN-γ)主要是在特定的抗原、有丝分裂原的刺激下由活化T淋巴细胞或NK细胞产生的一类具有广谱抗病毒免疫调节等多种生物学活性的糖蛋白。国内外在牛IFN-γ的研究和应用方面的工作已经开展很多,但不论是对免疫细胞功能及机体细胞免疫应答方面的研究,还是对疾病状态下IFN-γ产生水平的判定,都需要一种简便、快速的检测手段。应用牛IFN-γ单克隆抗体作为研究、检测IFN-γ的手段,在免疫机制的研究、免疫功能检测等领域具有广泛的应用。 本研究用原核表达的重组牛IFN-γ(rHis-BoIFN-γ)免疫6周龄BALB/c雌性小鼠,免疫3次后取其脾细胞和骨髓瘤细胞SP2/0进行融合。用建立的间接ELISA方法筛选阳性杂交瘤细胞,经3~5次亚克隆,最终获得12株能稳定分泌抗体的阳性杂交瘤细胞株。亚类鉴定结果显示12株杂交瘤细胞均为IgG,其中5株为IgG1,3株为IgG2a,4株为IgG2b。12株杂交瘤细胞在体外具有稳定分泌抗BoIFN-γ单克隆抗体的能力。Western-blot及间接ELISA证明12株单抗均可特异性的结合rBoIFN-γ蛋白。通过间接免疫荧光显示,12株单抗均与真核细胞BHK21表达的rBoIFN-γ反应产生荧光反应,证明了单抗能够与真核细胞产生的BoIFN-γ反应,证实了单抗的特异性。ELISA叠加试验表明,3C2与1H4、1G6与1G4针对不同表位,1A10、1B2、2B9、3C4 4株和1C1与1G6、1G4与3C2、1A10与1G8针对相同或相近的表位。为利用单克隆抗体建立检测BoIFN-γ抗原捕获ELISA方法诊断牛疫病,及重组BoIFN-γ的亲和层析纯化提供了物质材料,为深入研究BoIFN-γ单抗在牛临床免疫学方面的应用奠定了基础。
[Abstract]:Interferon 纬 (IFN- 纬) is a class of glycoproteins with broad spectrum antiviral immunomodulation and other biological activities produced by activated T lymphocytes or NK cells stimulated by specific antigens and mitogen. A lot of work has been done on the research and application of bovine IFN- 纬 at home and abroad, but it is necessary to study the function of immune cells and the cellular immune response of organism, and to judge the level of IFN- 纬 production under the condition of disease. Rapid detection. The monoclonal antibody against bovine IFN- 纬 was used as a method to detect IFN- 纬. It has been widely used in the study of immune mechanism and immune function. In this study, recombinant bovine IFN- 纬 rHis-BoIFN- 纬 was used to immunize 6-week-old BALBP / c female mice with recombinant bovine IFN- 纬 rHis-BoIFN- 纬. The spleen cells and myeloma cells SP2 / 0 were harvested for fusion after 3 times immunization. The positive hybridoma cells were screened by indirect Elisa. After 3 subclones, 12 positive hybridoma cell lines were obtained which could secrete antibodies stably. The results of subclass identification showed that all 12 hybridoma cells were IgG, of which 5 were IgG1G 1, 3 were IgG2b.12 hybridoma cells had the ability to secrete monoclonal antibody against BoIFN- 纬 stably in vitro. Western-blot and indirect Elisa showed that 12 McAbs could be specific. Sex binding rBoIFN- 纬 protein. The results of indirect immunofluorescence showed that all 12 McAbs reacted with rBoIFN- 纬 expressed in eukaryotic cell BHK21, which proved that McAb could react with BoIFN- 纬 produced by eukaryotic cells. The specificity of the McAbs was confirmed by Elisa superposition test. The results showed that 3C2 and 1H4P1G6 and 1G4 were targeted at the same or close epitopes of 1A101B2O2B9O3C4 and 1C1 and 1G6G4 and 3C2O1A10 against the same or similar epitopes of 1G8. It provides a material for the establishment of monoclonal antibody to detect BoIFN- 纬 antigen capture Elisa and the purification of recombinant BoIFN- 纬 by affinity chromatography. It lays a foundation for further study on the application of BoIFN- 纬 monoclonal antibody in bovine clinical immunology.
【学位授予单位】：东北农业大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2011
【分类号】：R392
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，本文编号：1994452
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