miR-542-5p对1-磷酸鞘氨醇诱导的IEC-6细胞增殖的抑制作用
本文选题：miR--p + -磷酸鞘氨醇 ； 参考：《中国病理生理杂志》2017年07期
【摘要】：目的:观察miR-542-5p对1-磷酸鞘氨醇(S1P)诱导的大鼠小肠隐窝上皮IEC-6细胞增殖的影响。方法:建立稳定表达鞘氨醇激酶1(SphK1)的IEC-6细胞系(SphK1-IEC-C1和SphK1-IEC-C2),Western blot检测SphK1蛋白表达,放射性同位素示踪法测定SphK1酶活性和S1P分泌,细胞计数绘制生长曲线观察细胞增殖,流式细胞术分析细胞周期变化,实时荧光定量PCR检测miR-542-5p表达。结果:与对照细胞相比,细胞系SphK1-IECC1和SphK1-IEC-C2中SphK1蛋白表达显著升高,SphK1酶活性升高,细胞内外S1P浓度升高,细胞生长速度加快,细胞周期中S期细胞所占比例升高,miR-542-5p的表达量降低;在IEC-6细胞的培养液中加入S1P(0.5~10μmol/L),能显著抑制miR-542-5p表达;采用siRNA干扰降低IEC-6细胞的SphK1,可明显升高miR-542-5p表达。升高SphK1-IEC-C1和SphK1-IEC-C2细胞中miR-542-5p水平,则可降低S期细胞比例,抑制细胞增殖。结论:S1P通过降低IEC-6细胞中miR-542-5p水平,引起细胞周期由G1期向S期转换,促进IEC-6细胞增殖。
[Abstract]:Aim: to observe the effect of miR-542-5p on the proliferation of rat intestinal crypt epithelium IEC-6 cells induced by sphingosine 1-phosphate. Methods: SphK1 and SphK1 protein expression were detected by Western blot in IEC-6 cell lines expressing sphingosine kinase 1 and SphK1). SphK1 enzyme activity and S1P secretion were detected by radioisotope tracer assay. Cell count and growth curve were plotted to observe cell proliferation. Cell cycle changes were analyzed by flow cytometry and miR-542-5p expression was detected by real-time fluorescent quantitative PCR. Results: compared with control cells, the expression of SphK1 protein in SphK1-IECC1 and SphK1-IEC-C2 cells increased significantly, the activity of SphK1 enzyme increased, the concentration of S1P increased, the cell growth rate increased, and the expression of SphK1 protein increased in cell cycle. The expression of miR-542-5p in IEC-6 cells was significantly inhibited by adding 10 渭 mol 路L ~ (-1) of S1PU _ (0.5) in IEC-6 cell culture medium, and the expression of miR-542-5p in IEC-6 cells was significantly increased by using siRNA interference to decrease the expression of miR-542-5p in IEC-6 cells. The increase of miR-542-5p levels in SphK1-IEC-C1 and SphK1-IEC-C2 cells could decrease the proportion of S phase cells and inhibit the proliferation of SphK1-IEC-C2 cells. Conclusion by reducing the level of miR-542-5p in IEC-6 cells, the cell cycle changes from G1 phase to S phase and promotes the proliferation of IEC-6 cells.
【作者单位】： 新疆医科大学基础医学院生理学教研室;中山大学附属第三医院内分泌科;
【基金】：新疆维吾尔自治区自然科学基金资助项目(No.2013211A072)
【分类号】：R363
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