骨膜细胞体外分化成骨的基因表达和功能检测

发布时间：2018-06-21 23:18

  本文选题：骨膜细胞 + 成骨分化　； 参考：《汕头大学》2011年硕士论文

【摘要】：【目的】 观察骨膜细胞经成骨因子BMP7诱导后的细胞生物学特征,鉴定骨膜细胞经BMP7体外诱导分化为成骨细胞的基因表达和细胞功能。 【方法】 取材于成人胫骨骨膜,常规体外培养。实验分为实验组和对照组,分别加入BMP7加成骨辅助剂和单纯成骨辅助剂进行培养。CCK-8法检测细胞增殖活性,第5天、第10天、第15天和第20天分别采用RealTime-PCR检测骨钙素基因表达,ELISA法检测上清液ALP、骨钙素及骨桥蛋白的水平,甲苯胺蓝染色检测糖胺聚糖及RealTime-PCR检测Ⅱ型胶原基因,比色法检测细胞ALP活性,ALP染色法检测ALP、Von Kossa染色法检测钙结节。 【结果】 1、两组骨钙素基因表达及上清液ALP、骨钙素、骨桥蛋白的含量均增高,实验组与对照组差异有统计学意义(P0.05)。 2、两组细胞的ALP和钙结节染色阳性率增高,实验组与对照组差异有统计学意义(P0.05)。 3.、甲苯胺蓝染色阳性率及Ⅱ型胶原基因表达表现为先高后低,实验组与对照组差异有统计学意义(P0.05)。 【结论】 1、骨膜细胞在BMP7诱导下体外大量增殖、分化成骨,经过基因和细胞功能检测证实其具有明显的成骨特异基因表达,并具有合成、分泌成骨特异蛋白的功能。 2、BMP7体外诱导骨膜细胞成骨分化过程中,除直接分化成骨外,还存在部分细胞先经软骨细胞形成再钙化成骨的现象。 3、经骨膜细胞-BMP7途径在体外可获取大量具备典型生物学特征的成骨细胞,并可用于组织工程的体外构骨及临床应用。
[Abstract]:[objective] to observe the biological characteristics of periosteal cells induced by osteogenic factor BMP7. To identify the gene expression and cell function of osteoblasts induced by BMP7. [methods] the periosteum of adult tibia was cultured in vitro. The experiment was divided into experimental group and control group. BMP7 plus bone assistant and osteoblast adjuvant were added respectively to culture. CCK-8 method was used to detect cell proliferation activity. On the 15th and 20th days, the levels of ALP, osteocalcin and osteopontin in supernatant were detected by RealTime-PCR, glycosaminoglycan by toluidine blue staining and collagen 鈪，

本文编号：2050464