缺氧对HUVECs生物学特性及VEGFR表达影响的体外实验研究
发布时间：2018-06-26 01:31
本文选题：脐静脉内皮细胞 + 缺氧 ； 参考：《泸州医学院》2012年硕士论文
【摘要】：目的：缺氧（Hypoxia）被认为是血管形成的关键因素，因为缺氧条件下可引起血管形成的关键因子血管内皮生长因子(VascularEndothelial Growth Factor,VEGF)形成。VEGF可以促进内皮细胞的增殖和迁移、增加血管通透性，因此被确认为是血管生成的主要原因；而血管内皮生长因子刺激血管内皮细胞的增殖、迁移和管型的形成是通过与其相对应特异性血管内皮生长因子受体（Vascularendothelial Growth Factor Receptor,VEGFR）结合产生效应。缺氧对血管内皮细胞功能及生长因子的作用仍不明确，所以本实验尝试研究在缺氧条件下对培养的脐静脉内皮细胞(Human Umbilical VeinEndothelial Cells, HUVEC)血管内皮生长因子以及膜表面受体表达的变化及其缺氧条件下对HUVEC生物学功能的影响。方法：本实验以购买HUVEC细胞株为究对象，HUVEC细胞传代培养至第三代或第四代备用。分别在缺氧与常氧条件下培脐静脉内皮细胞，比较两种状态下HUVEC增殖、迁移以及体外管腔能力；免疫荧光染色比较VEGFR1、VEGFR2蛋白的表达变化；RT PCR检测两种条件下VEGF mRNA表达水平的改变。以上原始实验数据使用SPSS13.0软件分析数据，数据用均数±标准差（x±s）表示，两样本均数比较使用独立样本t检验；多个样本两两比较先使用方差分析（ANOVA），然后使用多样本两两比较中的SNK法进行比较，以P0.05表示差异有统计学意义。结果：1、缺氧组与常氧组在24h、48h时无明显差异性（P0.05）；在96h，缺氧组和常氧组比较，细胞的增殖差异明显（P0.01），缺氧组的细胞增殖受到抑制。2、细胞迁移分析实验中，常氧组与缺氧组在48小时的后细胞迁移面积分析结果显示差异具有统计学意义（P0.01），常氧组的细胞的迁移能力明显强于实验组。3、常氧组在48小时后即能够形成毛细血管腔样结构，但缺氧组在48小时仍未形成管腔样结构。4、在缺氧组和常氧组HUVEC培养48h后使用免疫荧光技术检测VEGFR1、VEGFR2，通过检测其光密度值检测其蛋白的表达量，，其结果显示实缺氧组和常氧组比较VEGFR1、 VEGFR2蛋白表达量均有明显下降（P0.01），但VEGFR1/VEGFR2值增大（P0.01）。5、实验组在0h、12h、24h、48h四个时相点分别提取RNA，RT PCR检测VEGF mRNA表达量，VEGF表达量在0h和12h时相点无明显差异（P0.05），在24h的时相点VEGF表达量开始增加（P0.05），但24h和48h时相点表达量明显差异（P0.05）。结论：HUVEC在缺氧的作用下表现出了细胞增殖、迁移、体外管腔形成能力的减低；VEGFR1、VEGFR2蛋白同时减少的但同时其比值大幅增加，且VEGF mRNA表达增加。其结果表明缺氧时阻断VEGF与VEGFR2结合产生的对内皮细胞刺激反应，保持内皮细胞相对的稳定状态，以最大限度地保留血管内皮细胞活力和恢复能力，同时也为缺氧区血管新生创造了条件。
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本文编号：2068451
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