ERβ对骨髓间充质干细胞软骨分化潜能的影响

发布时间：2018-06-27 14:58

  本文选题：雌激素受体β + 骨髓间充质干细胞　； 参考：《暨南大学》2012年硕士论文

【摘要】：目的通过体外培养C57与ERβ~(-\-)雌性小鼠的BMMSCs，探讨其向软骨细胞分化的潜能；病理学检查及Mirco CT扫描单侧股骨滑车全层软骨、软骨下骨缺损模型，对比观察缺损软骨、软骨下骨修复过程。 方法体外实验：采用密度梯度离心结合差速贴壁培养法分离、扩增两组小鼠的BMMSCs，流式细胞仪检测第3代细胞表面抗原标志物CD29、CD44、CD105、CD34、CD45、CD11b；CCK-8法检测不同时间点的细胞活性，绘制生长曲线；应用含软骨诱导剂（10ng/mLTGF-β1+100nmol/L地塞米松+50ug/mL维生素C）的无血清高糖DMEM培养基，诱导培养第3代BMMSCs21天，免疫组化检测细胞Ⅱ型胶原表达，RT-PCR检测细胞Ⅱ型胶原mRNA表达量。体内实验：制作两组小鼠单侧股骨滑车全层软骨、软骨下骨缺损模型，术后1、2、3、4周取材，病理学检查及Mirco CT扫描，，对比观察缺损软骨、软骨下骨修复过程，比较两组修复差异。 结果流式细胞仪检测表明C57组和ERβ~(-\-)组第3代细胞均高表达CD29、CD44、CD105，低表达CD34、CD45、CD11b，提示体外成功培养BMMSCs细胞；免疫组化证实诱导后的两组细胞均表达特异性Ⅱ型胶原；C57组和ERβ~(-\-)组向软骨细胞诱导分化率分别为（56.30±5.25）%和（42.61±6.72）%（P＜0.05）；RT-PCR结果提示C57组BMMSCs诱导分化的软骨细胞分泌Ⅱ型胶原mRNA较ERβ~(-\-)组高（43.08±8.73）%（P＜0.05）。Mirco CT扫描显示两组模型软骨下骨缺损缺损区域在1周内即开始出现新骨，4周已骨性愈合；病理学检查两组模型显示，新生透明软骨参与修复缺损软骨区域。 结论 1采用密度梯度离心结合差速贴壁培养法能获得较纯的BMMSCs。 2无血清高糖DMEM培养基中加入10ng/L TGF-β1、100nmol/L地塞米松、50ug/ml维生素C可诱导BMMSCs向软骨细胞分化。 3缺乏ERβ基因的BMMSCs在体外诱导分化为软骨细胞的能力减弱，且诱导形成的软骨细胞分泌Ⅱ型胶原的能力降低。 4在小鼠股骨滑车，d=0.6mm的全层软骨缺损能自我修复，修复组织含透明软骨细胞。
[Abstract]:Objective to investigate the differentiation potential of BMMSCsfrom C57 and ER 尾 ~ (-\ -) female mice into chondrocytes in vitro. Subchondral bone repair process. Methods: the BMMSCs of the two groups were amplified by density gradient centrifugation and differential adherent culture. Flow cytometry was used to detect the cell surface antigen markers of the 3rd generation. The growth curve was drawn, and the serum-free high glucose DMEM medium containing 10 ng / mLTGF- 尾 1 100nmol / L dexamethasone 50ugr / mL vitamin C was used to induce the third generation of BMMSCs for 21 days. The expression of type 鈪

本文编号：2074296