Let-7b对骨髓基质干细胞诱导分化为神经元的作用研究

发布时间：2018-06-29 23:59

  本文选题：神经元 + 干细胞　； 参考：《中国全科医学》2017年33期

【摘要】：目的探讨Let-7b在大鼠骨髓间充质干细胞(MSCs)分化为神经元过程中的作用。方法 2013年1—12月将80只SPF级SD大鼠随机分为空白对照组、阴性对照组、Let-7b-up慢病毒载体(LV-rno-Let-7bup)组、Let-7b-inhibition慢病毒载体(LV-rno-Let-7b-inhibition)组,每组20只。将阴性对照组、LV-rnoLet-7b-up组、LV-rno-Let-7b-inhibition组大鼠分别感染EGFP空病毒,采用颈椎脱臼法处死4组大鼠,并获取MSCs,传代培养4代后备用。取传代培养的MSCs感染慢病毒,具体为:空白对照组、阴性对照组不进行感染,LVrno-Let-7b-up组、LV-rno-Let-7b-inhibition组分别感染LV-rno-Let-7b-up、Let-7b-inhibition,采用MTT法检测感染前、感染后24 h、感染后5 d MSCs存活率。采用法舒地尔对4组进行诱导实验,观察MSCs分化为神经元的分化效率。采用免疫组化法检测4组神经元烯醇化酶(NSE)、神经微管结合蛋白(MAP-2)、微管相关蛋白(Tau)水平,RT-PCR法检测4组NSE、MAP-2、Tau mRNA水平。结果 LV-rno-Let-7b-up组MSCs于LVrno-Let-7b-up感染后第3天荧光表达最强,LV-rno-Let-7b-inhibition组MSCs于LV-rno-Let-7b-inhibition感染后第5天荧光表达最强。感染第5天时,阴性对照组、LV-rno-Let-7b-up组、LV-rno-Let-7b-inhibition组MSCs感染率分别为87.46%、86.81%、87.12%。感染后24 h、5 d阴性对照组、LV-rno-Let-7b-up组、LV-rno-Let-7b-inhibition组MSCs存活率低于空白对照组(P0.05);阴性对照组、LV-rno-Let-7b-up组、LV-rno-Let-7b-inhibition组感染后5 d MSCs存活率高于感染后24 h(P0.05)。阴性对照组和空白对照组部分MSCs呈现神经元样改变;LV-rno-Let-7b-up组极大部分MSCs出现典型的神经元样结构;LV-rno-Let-7b-inhibition组仅有少量MSCs出现典型的神经元样结构。LV-rno-Let-7b-up组NSE、MAP-2、Tau及其mRNA水平高于空白对照组、阴性对照组(P0.05);LV-rno-Let-7b-inhibition组NSE、MAP-2、Tau及其mRNA水平低于空白对照组、阴性对照组(P0.05)。结论感染LV-rno-Let-7b-up后大鼠MSCs分化为神经元的分化效率增加,提示Let-7b可促进MSCs向神经元分化。
[Abstract]:Objective to investigate the role of Let-7b in the differentiation of rat bone marrow mesenchymal stem cells (MSCs) into neurons. Methods from January to December 2013, 80 SPF SD rats were randomly divided into blank control group and LV-rno-Let-7bup group, 20 rats in each group were divided into two groups: LV-rno-Let-7b-inhibition group (LV-rno-Let-7b-inhibition) group and LV-rno-Let-7b-inhibition group (LV-rno-Let-7b-exhibition) group. The rats of LV-rnoLet-7b-up group in negative control group were infected with EGFP empty virus respectively. The rats of 4 groups were killed by cervical dislocated method. MSCs were obtained and cultured for 4 generations. The cultured MSCs were infected with lentivirus. The control group and negative control group were respectively infected with LV-rno-Let-7b-inhibition group. The survival rate of MSCs before infection, 24 hours after infection and 5 days after infection was detected by MTT method. The differentiation efficiency of MSCs into neurons was observed by using fasudil to induce the four groups. The levels of neuron enolase (NSE), neural microtubule-binding protein (MAP-2) and microtubule-associated protein (Tau) were detected by immunohistochemistry. Results the fluorescence expression of MSCs in LV-rno-Let-7b-up group was the strongest on the 3rd day after LVrno-Let-7b-up infection. The fluorescence expression of MSCs in LV-rno-Let-7b-exhibition group was the strongest on the 5th day after LV-rno-Let-7b-inhibition infection. On the 5th day of infection, the infection rate of MSCs in LV-rno-Let-7b-up group in negative control group was 87.46 and 87.12 in LV-rno-Let-7b-exhibition group, respectively. The survival rate of MSCs in the LV-rno-Let-7b-up group was lower than that in the control group (P0.05), and the survival rate of MSCs in the LV-rno-Let-7b-inhibition group was higher than that in the LV-rno-Let-7b-inhibition group at 5 days after infection (P0.05). In the negative control group and the blank control group, some MSCs showed neuron-like changes. Most of the MSCs in the LV-rno-Let-7b-up group showed typical neuron-like structure. Only a small number of MSCs in the LV-rno-Let-7b-exhibition group showed typical neuron-like structure. The NSEV-rno-Let-7b-up group showed higher NSE-MAP-2Tau and mRNA levels than those in the blank control group. LV-rno-Let-7b-inhibition group (P0.05) had lower mRNA levels of NSE-MAP-2Tau and negative control group (P0.05). Conclusion the differentiation efficiency of MSCs into neurons increased after infection with LV-rno-Let-7b-up, suggesting that Let-7b can promote the differentiation of MSCs into neurons.
【作者单位】： 郑州大学附属郑州中心医院神经内科;莫斯科国立谢东诺夫第一医科大学;郑州大学第一附属医院神经内科;
【基金】：国家自然科学基金资助项目(81071114,81371385)
【分类号】：R329.2

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本文编号：2083941