肠出血性大肠埃希菌0157噬菌体的分离鉴定及生物学特性的初步研究

发布时间：2018-07-11 10:04

  本文选题：肠出血性大肠埃希菌O157:H7 + 噬菌体　； 参考：《吉林大学》2012年硕士论文

【摘要】：肠出血性大肠埃希菌（enterohemorrhagic Escherichia coli, EHEC）O157：H7感染性腹泻是世界范围内的公共卫生问题。人感染EHEC O157：H7可表现为无症状携带者、腹泻、出血性肠炎、溶血性尿毒症和血栓性血小板减少性紫癜等临床表现和较高的死亡率［1］。噬菌体是感染细菌的病毒，广泛存在于自然环境中。毒性噬菌体对细菌裂解的特异性和高效性，，重新引起人们的重视，特别是近年来噬菌体在细菌性疾病（特别是耐药性细菌所致的感染）的治疗中具有独特的作用。因此，开展针对EHEC O157：H7噬菌体的深入研究具有重要的现实意义和潜在的应用价值。 本项研究以EHEC O157：H7为宿主菌，采用双层琼脂平板法从环境的污水中分离出一株能裂解EHEC O157：H7的毒性噬菌体，经纯化后对其生物学特性进行了初步的分析。通过电镜观察，EHEC O157：H7噬菌体的头部呈立体对称，直径约40nm，该噬菌体有一丝状长尾（长约100nm）。根据其形态结构EHEC O157：H7噬菌体在分类上属于有尾病毒目，管尾病毒科。采用氯化铯密度梯度离心和超滤管离心法可以很好地富集纯化后的噬菌体。噬菌体的核酸和酶切电泳显示，其基因组大小约为30kb，且含有多个EcoR I和EcoR V的酶切位点。SDS-PAGE分析表明，该噬菌体含有13种蛋白（包括衣壳结构蛋白和非结构蛋白）,相对分子量在220-16kD之间。 感染复数是研究噬菌体感染与产出之间量效关系的生物学指标之一。将噬菌体和细菌以不同的比例混合后，在不同时间观察噬菌体裂解宿主菌的效能。研究发现当EHEC O157：H7噬菌体与宿主菌的比例为1：100时，在180min的时间点，宿主菌的数量下降最为明显，由最初的10~8CFU/mL下降至10~4CFU/mL。在绘制一步生长曲线时发现，从噬菌体感染宿主菌到子代噬菌体的释放时间为10min，即噬菌体感染细菌的潜伏期。随着宿主菌的不断裂解和新的子代噬菌体的释放，当宿主菌接近全部被裂解时，噬菌体的数量达到最大值。从潜伏期到该时段为爆发期。本实验的生长曲线显示爆发时间是30min，裂解量为130PFU/cell。一般认为如果潜伏期和爆发期的时间较短，从另一个侧面亦可反映噬菌体裂解的高效能［2］。吸收率是噬菌体感染宿主菌的初期到噬菌体全部感染宿主菌的时间，本实验表明在10min内，游离的噬菌体就可以全部进入宿主菌，说明该噬菌体的特异性强及较高感染效率。经过噬菌体与不同细菌的交叉培养实验证明，该噬菌体具有严格的种属特异性。本实验还观察了三种保存方法对噬菌体活性的影响，观察噬菌体的活性。在4℃情况下，采用氯仿、氯仿：SM缓冲液和双层平板噬斑法保存噬菌体。结果表明：氯仿：SM缓冲液的保存效果比较理想，可以保存8个月而保持滴度不变。 对噬菌体生物学特性的全面了解是研制和开发抗菌生物制剂的前提。通过本研究，对此株肠出血性大肠埃希菌O157：H7噬菌体的生物学特性有了较初步的认识，为该噬菌体的进一步研究及动物实验打下基础。本实验结果表明该噬菌体是一种裂解性强、特异性高的毒性噬菌体，如将肠出血性大肠埃希菌噬菌体作为抗生物制剂应用在水源和环境的清洁、食品添加剂［3］及畜牧业领域将会有着广泛的应用前景。
[Abstract]:Enterohemorrhagic Escherichia coli ( EHEC ) 157 : H7 infectious diarrhea is a public health problem in the world . Human infection EHEC 157 : H7 can be expressed as asymptomatic carrier , diarrhea , hemorrhagic enteritis , hemolytic uremia and thrombopenia purpura , etc . The phage is a virus that is infected with bacteria and has a unique role in the treatment of bacterial diseases ( especially infections caused by drug - resistant bacteria ) .

In this study , EHEC O 157 鈭

本文编号：2114754