Skp2过表达载体的构建及表达

发布时间：2018-07-17 08:52

【摘要】：目的:在HEK293细胞中获得Skp2全长基因,构建其高效真核表达载体。方法:提取人HEK293细胞总RNA,反转录合成c DNA,以特异性引物扩增Skp2全长基因并克隆入p Babe载体,筛选阳性克隆进行序列测定后,鉴定其表达情况。结果:PCR扩增得到特异性的约1300 bp的片段,序列测定结果表明与国外已发表的序列完全一致;将构建的p Babe-Skp2质粒转入HEK293细胞,与空质粒对照相比,Skp2的m RNA和蛋白表达水平均提高,并且p27蛋白水平降低。结论:构建获得Skp2基因高效真核表达载体,将用于Skp2的功能研究。
[Abstract]:Aim: to construct an efficient eukaryotic expression vector of Skp2 gene from HEK293 cells. Methods: total RNAs were extracted from human HEK293 cells, and c DNA was synthesized by reverse transcription. Skp2 full-length gene was amplified by specific primers and cloned into pBabe vector. After screening positive clones for sequencing, the expression of Skp2 gene was identified. Results the specific fragment of about 1300 BP was amplified by 1% PCR, and the sequence analysis showed that it was identical with the published sequence, and the expression level of mRNAs and proteins of pBabe-Skp2 was increased compared with that of blank plasmid, and the pBabe-Skp2 plasmid was transformed into HEK293 cells. And the level of p27 protein decreased. Conclusion: the efficient eukaryotic expression vector of Skp2 gene was constructed and used in the functional study of Skp2.
【作者单位】： 陕西中医药大学;青岛大学附属医院;第四军医大学;
【分类号】：Q78;R3416

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本文编号：2129885