重组hIL-10抗家兔皮肤移植排斥反应及其对IL-2、IFN-γ、GCs、T细胞凋亡的影响

发布时间：2018-07-25 06:13

【摘要】：目的：观察重组人白细胞介素10 (Recombinant Human Interleukin-10, rhIL-10)抗家兔皮肤移植排斥反应及血清IL-2、IFN-γ、GCs、T细胞凋亡率等变化,并探讨IL-10抗免疫排斥的机制。 方法：家兔36只,雌雄不限,分供体和受体各18只,每只供体家兔为一只受体家兔供皮,于背部行皮肤移植手术。根据肌注不同药物将18只受体家兔随机分成生理盐水阴性对照组(1ml/d), rhIL-10实验组(低剂量5μg/kg/d;高剂量10μg/kg/d),环孢菌素A (CsA)阳性对照组(低剂量5mg/kg/d;高剂量10mg/kg/d), rhIL-10+ CsA联合组(5μg + 5mgkg/d),共6组,每组3只。各组均在术前1天及术后9天持续肌肉注射相应药物。术后每天观察移植皮片情况,记录排斥反应时间和皮片存活时间。各组分别于术前1天、术后1、4、7、14、21、28天采集外周血,用ELISA法检测血清IL-2、IFN-γ、GCs的变化情况；流式细胞术检测各组家兔术后1、4、7、14天外周血T细胞凋亡率的变化。 结果：(1)移植术后家兔一般状况：CsA高剂量组家兔在用药期间出现食欲不振,大小便明显减少,毛发易脱落,精神状态欠佳等症状,用药停止后症状好转。rhIL-10组、rhIL-10+ CsA联合组及生理盐水阴性对照组未无出现此现象。(2)移植皮片开始出现排斥反应时间与存活时间：与生理盐水阴性对照组比较,各用药组家兔皮片开始出现排斥反应时间与存活时间均延迟(p0.05)。与CsA低剂量组相比,rhIL-10高剂量组移植皮片存活时间未见差异(p0.05)。与CsA阳性对照组相比,rhIL-10+ CsA联合组皮片存活时间无明显差异p0.05)。与rhIL-10低剂量组比较,rhIL-10+ CsA组皮片开始出现排斥反应时间与存活时间均延迟(p0.05)。(3)血清IL-2与INF-γ含量检测结果表明,与生理盐水阴性对照组比较,各用药组家兔血清IL-2与INF-γ水平均有不同程度降低(p0.05)。与CsA低剂量组相比,rhIL-10组血清IL-2与INF-γ水平未见差异p0.05)。与CsA高剂量组比较,rhIL-10+ CsA组血清IL-2与INF-γ水平差异不明显(p0.05)；rhIL-10低剂量组、CsA低剂量组血清IL-2、INF-γ水平高于rhIL-10+ CsA联合组(p0.05)(4)T细胞凋亡率与糖皮质激素检测结果显示,与生理盐水阴性对照组比较,术后各用药组T细胞凋亡率与糖皮质激素水平明显升高(p0.05)；与CsA低剂量组相比,rhIL-10组T细胞凋亡率与糖皮质激素水平未见差异(p0.05)。与CsA组相比,rhIL-10+ CsA组的T细胞凋亡率与糖皮质激素水平未见差异(p0.05)。 结论：(1)rhIL-10对同种异基因家兔皮肤移植排斥有抑制作用,可延长移植皮片存活时间,与CsA连用具有一定的协同作用。(2)IL-10延缓排斥反应发生的机制可能是与其降低外周血IL-2与INF-γ水平,促进T细胞凋亡及糖皮质激素分泌引发免疫抑制或诱导免疫耐受有关。
[Abstract]:Aim: to observe the effects of recombinant human interleukin-10 (Recombinant Human interleukin-10 (rhIL-10) on rabbit skin graft rejection and the apoptosis rate of serum IL-2- 纬 -IFN- 纬 -GCsC T cells, and to explore the mechanism of IL-10 anti-immune rejection. Methods: 36 rabbits, male and female, were divided into two groups: 18 donors and 18 recipients. Each donor rabbit was a recipient rabbit skin donor, and skin transplantation was performed on the back. Eighteen recipient rabbits were randomly divided into normal saline negative control group (1ml/d), rhIL-10 group (low dose 5 渭 g / kg / d; high dose 10 渭 g/kg/d), cyclosporin A (CsA) positive control group (low dose 5 mg / kg / d; high dose 10mg/kg/d) and rhIL-10 CsA combined group (5 渭 g / kg 5mgkg/d). There were 3 rats in each group. All groups were continuously injected intramuscularly 1 day before operation and 9 days after operation. The grafts were observed every day after operation, the rejection reaction time and the survival time of the grafts were recorded. The peripheral blood samples were collected 1 day before operation and 21 days after operation, and the changes of serum IL-2- IFN- 纬 GCs were detected by ELISA method, and the apoptosis rate of peripheral blood T cells was detected by flow cytometry on the 14th day after operation. Results: (1) the general condition of the rabbits after transplantation was that the rabbits in the high dose group of 10% CSA had the symptoms of loss of appetite, obvious decrease in feces and urine, loss of hair, poor mental state, and so on. There was no such phenomenon in the rhIL-10 CsA combination group and the saline negative control group. (2) the rejection reaction time and survival time of the skin grafts began to appear: compared with the saline negative control group. The reaction time and survival time were delayed in all groups (p0.05). There was no significant difference in graft survival time between high dose group and low dose CsA group (p0.05). There was no significant difference in survival time between rhIL-10 CsA group and CsA positive control group (p0.05). Compared with the low dose rhIL-10 group, the serum IL-2 and INF- 纬 levels in the rhIL-10 CsA group were significantly delayed (p0.05). (3) compared with the normal saline negative control group. The levels of serum IL-2 and INF- 纬 were decreased in different groups (p0. 05). There was no difference in serum IL-2 and INF- 纬 levels between rhIL-10 group and low dose CsA group (p0.05). There was no significant difference in serum IL-2 and INF- 纬 levels between rhIL-10 CsA group and CsA high dose group (p0.05). The serum IL-2INF- 纬 level in rhIL-10 low dose group was higher than that in rhIL-10 CsA combined group (p0.05) (4) T cell apoptosis rate and glucocorticoid detection. Compared with normal saline negative control group, T cell apoptosis rate and glucocorticoid level were significantly increased in each treatment group after operation (p0.05), but there was no difference between rhIL-10 group and CsA low-dose group (p0.05). There was no significant difference in T cell apoptosis rate and glucocorticoid level between rhIL-10 CsA group and CsA group (p0.05). Conclusion: (1) rhIL-10 can inhibit the skin allograft rejection in allogeneic rabbits, prolong the survival time of skin grafts and have a synergistic effect with CsA. (2) the mechanism of IL-10 delaying rejection may be related to the reduction of IL-2 and INF- 纬 levels in peripheral blood. Promoting T cell apoptosis and glucocorticoid secretion may induce immune suppression or tolerance.
【学位授予单位】：遵义医学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2011
【分类号】：R392

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本文编号：2142876