重组酶介导扩增方法快速检测黄热病毒

发布时间：2018-07-29 08:53

【摘要】：目的本研究采用重组酶介导的等温核酸扩增方法(RAA),通过使用逆转录酶,建立黄热病毒的一步法等温核酸扩增(RT-RAA)方法。方法根据黄热病毒基因组保守序列设计引物和探针,建立并分析RT-RAA的重复性、特异性、灵敏度;以所建立方法对黄热病毒样本进行检测,同时以基因测序进行验证。结果黄热病毒RT-RAA扩增,体系中加入40 U的逆转录酶扩增效果最佳。该方法检测时间短(20 min),并且灵敏度高,检测下限可达100 copy,与登革病毒、西尼罗病毒、日本乙型脑炎病毒、基孔肯雅热病毒等蚊媒病毒无交叉反应,具有良好的特异性。结论构建的黄热病毒RT-RAA方法具有快速、特异以及灵敏的特点,适应于黄热病毒的口岸快速检测。
[Abstract]:Objective to establish a one step isothermal nucleic acid amplification (RT-RAA) method for yellow fever virus by means of recombinant enzyme mediated isothermal nucleic acid amplification (RAA),). Methods primers and probes were designed according to the conserved sequence of yellow fever virus genome to establish and analyze the repeatability, specificity and sensitivity of RT-RAA. Results the RT-RAA amplification of yellow fever virus was the best when 40 U reverse transcriptase was added into the system. The detection time is short (20 min), sensitivity is high, the detection limit is up to 100copy.There is no cross reaction with dengue virus, West Nile virus, Japanese encephalitis virus, Kikungunya fever virus and other mosquito-borne viruses), so it has good specificity. Conclusion the RT-RAA method of yellow fever virus is rapid, specific and sensitive, which is suitable for rapid detection of yellow fever virus at port.
【作者单位】： 浙江国际旅行卫生保健中心;西藏国际旅行卫生保健中心;江苏奇天基因生物科技有限公司;
【基金】：国家质检总局科技计划项目(2014IK062) 浙江出入境检验检疫局科技计划项目(ZK2014034)
【分类号】：R392

【参考文献】

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【共引文献】

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本文编号：2152152