高渗应激下ERK信号转导通路在兔髓核细胞凋亡中的作用

发布时间：2018-08-06 14:19

【摘要】：目的：观察高渗透压对体外培养的兔髓核细胞凋亡的影响及细胞外信号调节激酶(ERK1/2)信号转导通路在此过程中的作用。 方法：用不同的渗透压梯度以及ERK1/2特异性抑制剂PD98059(50μM)分不同作用时间处理髓核细胞；流式细胞仪检测髓核细胞在不同处理组的凋亡情况,蛋白质免疫印迹技术检测各组ERK1/2和p-ERK1/2蛋白的表达情况；免疫荧光标记技术检测p-ERK1/2蛋白在髓核细胞内的分布情况。 结果：高渗透压(600mOsm)培养基中兔髓核细胞凋亡显著增加,与对照组相比差异有统计学意义(P=0.013),并呈时间依赖性；PD98059预处理组与相应时间段同渗透压组相比,细胞凋亡进一步显著地增加(P=0.035)；400mOsm组及其抑制组在各时间段细胞凋亡均不明显；600mOsm高渗透压显著激活p-ERK1/2的表达,并且在3h组表达水平最高,与对照组比较差异显著(P=0.027),而PD98059几乎阻断p-ERK1/2的表达；免疫荧光标记检测到p-ERK1/2在600mOsm高渗组的细胞胞浆和胞核中均有分布。 结论：体外培养的兔髓核细胞能适应轻度增加的渗透压(400mOsm)环境,而高渗透压(600mOsm)应激下可显著诱导其凋亡,PD98059特异性抑制高渗透压应激诱导的短暂的ERKl/2激活并进一步明显诱导兔髓核细胞的凋亡,高渗透压应激诱导激活的ERKl/2信号转导通路具有抑制兔髓核细胞凋亡的作用。
[Abstract]:Aim: to investigate the effect of high osmotic pressure on apoptosis of cultured rabbit nucleus pulposus cells and the role of extracellular signal regulated kinase (ERK1/2) signal transduction pathway in the process. Methods: the nucleus pulposus cells were treated with different osmotic pressure gradient and PD98059 (50 渭 M), a specific inhibitor of ERK1/2, and the apoptosis of nucleus pulposus cells in different treatment groups was detected by flow cytometry. The expression of ERK1/2 and p-ERK1/2 protein was detected by Western blot and the distribution of p-ERK1/2 protein in nucleus pulposus cells was detected by immunofluorescence labeling. Results: the apoptosis of rabbit nucleus pulposus cells in high osmotic pressure (600mOsm) medium was significantly increased compared with the control group (P0. 013). Apoptosis was further significantly increased in the 400mOsm group and its inhibitory group. The high osmotic pressure of 600mOsm did not significantly activate the expression of p-ERK1/2, and the highest expression level was observed in the 3h group. Compared with the control group, the expression of p-ERK1/2 was almost blocked by PD98059, and the distribution of p-ERK1/2 in cytoplasm and nucleus of 600mOsm hypertonic group was detected by immunofluorescence labeling. Conclusion: cultured rabbit nucleus pulposus cells can adapt to slightly increased osmotic pressure (400mOsm) environment. However, high osmotic pressure (600mOsm) stress could induce apoptosis of PD98059, specifically inhibit transient ERKl/2 activation induced by high osmotic stress and further induce apoptosis of rabbit nucleus pulposus cells. High osmotic stress induced activation of ERKl/2 signal transduction pathway can inhibit the apoptosis of rabbit nucleus pulposus cells.
【学位授予单位】：青岛大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2012
【分类号】：R363

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本文编号：2168001