hTERT多表位肽致敏mDC诱导CTL对HLA-A24阳性肿瘤细胞杀伤效应的研究

发布时间：2018-08-11 15:16

【摘要】：目的:研究人工合成人端粒酶逆转录酶(hTERT)多表位混合肽(MAPs)经髓样树突状细胞(mDC)摄取、提呈后,诱导特异性细胞毒性T淋巴细胞(CTL)对HLA-A24阳性肿瘤细胞的免疫杀伤效应。 方法:人工合成四分支的树状串联hTERT表位肽(MAPs)及其各单表位多肽。取HLA-A24阳性健康志愿者的外周血,用免疫磁珠法分选并培养mDC。用尼龙毛柱法纯化T淋巴细胞并培养。以各表位肽致敏mDC后,诱导特异性CTL增殖,并以表达hTERT且以HLA-A24阳性肿瘤细胞株及HLA-A2/24双阴性肿瘤细胞株为靶细胞行杀伤实验。用ELISA法检测不同时间点培养基上清液中IL-12、TNF-α的分泌量;用流式细胞术检测CTL对肿瘤细胞的特异性杀伤效应。 结果:以源于hTERT的T淋巴细胞表位I540(ILAKFLHWL)、V461(VYGFVRACL)及L766(LTDLQPYMRQFVAHL)合成4分支MAPs多肽及各单表位混合多肽。外周血单个核细胞经免疫磁珠法阴性分选后可得到mDC(72.59%),刺激成熟后的mDC高表达MHC-I类分子(91.08%)、MHC-II类分子(83.90%),及共刺激分子CD86(77.13%)、CD83(92.16%)。以人工合成的hTERT多表位混合肽致敏mDC后,能有效刺激CTL增殖,并可诱导对HLA-A24阳性肿瘤细胞株的特异性杀伤作用,且MAPs多肽较单表位混合多肽的致敏效果更具显著性(P0.05),相同条件下,CTL对HLA-A2/24双阴性肿瘤细胞株无显著性杀伤效应。 结论:以人工合成的hTERT多表位混合肽致敏mDC后能有效诱导CTL的产生,并可特异性杀伤HLA-A24阳性的肿瘤细胞,在肿瘤免疫治疗中具有重要的意义。
[Abstract]:Aim: to study the immunoreactivity of human telomerase reverse transcriptase (hTERT) multiepitope mixed peptide (MAPs) (MAPs) on HLA-A24 positive tumor cells induced by specific cytotoxic T lymphocyte (CTL) (CTL) after (mDC) uptake by myeloid dendritic cells (MDC). Methods: four branched dendritic tandem hTERT epitope peptide (MAPs) and its single epitope peptides were synthesized. The peripheral blood of healthy volunteers with positive HLA-A24 was isolated and cultured by immunomagnetic beads. T lymphocytes were purified and cultured by nylon hair column method. The specific CTL proliferation was induced by sensitizing mDC with various epitope peptides, and the target cells were HLA-A24 positive tumor cell lines and HLA-A2/24 double negative tumor cell lines, and the target cells were HLA-A24 positive tumor cells and HLA-A2/24 double negative tumor cell lines. The secretion of IL-12 TNF- 伪 in supernatant of medium at different time points was detected by ELISA method, and the specific killing effect of CTL on tumor cells was detected by flow cytometry. Results: four branched MAPs peptides and mixed monoepitope peptides were synthesized from the T lymphocyte epitope I540 (ILAKFLHWL) hV461 (VYGFVRACL) and L766 (LTDLQPYMRQFVAHL) derived from hTERT. MDC (72.59%) was obtained by immunomagnetic bead negative sorting in peripheral blood mononuclear cells (PBMC). The high expression of MHC-I class II molecules (91.08%) and costimulatory molecule CD86 (77.13%) CD83 (92.16%) were obtained in mature mononuclear cells (91.08%) and costimulator CD86 (77.13%) respectively. Sensitizing mDC with synthetic hTERT polyepitope mixed peptide could effectively stimulate the proliferation of CTL and induce the specific killing effect on HLA-A24 positive tumor cell line. The sensitizing effect of MAPs polypeptide was more significant than that of mono-epitope mixed polypeptide (P0.05). Under the same condition, MAPs had no significant killing effect on HLA-A2/24 double-negative tumor cell line. Conclusion: sensitizing mDC with synthetic polypeptide of hTERT multiepitope can effectively induce the production of CTL and can specifically kill HLA-A24 positive tumor cells. It is of great significance in tumor immunotherapy.
【学位授予单位】：重庆医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2011
【分类号】：R392

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本文编号：2177378