脂肪干细胞治疗促进组织血管化的旁分泌机制中细胞因子来源的探讨

发布时间：2018-09-03 20:10

【摘要】：目的：探索脂肪干细胞(adipose-derived cells,ADSCs)治疗促进组织血管化的治疗机理，为细胞治疗的临床转化研究提供理论基础。 方法：1、ADSCs的分离培养与鉴定 在无菌条件下，取出wistar大鼠腹股沟脂肪垫，用氯霉素冲洗，于胶原酶中振荡消化，低速离心，细胞筛网过滤后接种于培养皿，获得原代ADSCs。 取第三代ADSCs用成软骨、成脂诱导培养液诱导培养，，分别行Ⅱ型胶原染色及油红O染色鉴定。 2、建立裸鼠随意皮瓣模型 在裸鼠背部掀起1cm×2.5cm大小随意皮瓣，于皮瓣肉膜面分别注射约1×107个已标记CM-Dil的ADSCs0.2ml混悬液(实验组)及等体积的PBS(对照组)。 3、血管化细胞因子水平分析 3、1将植入的ADSCs与裸鼠自身的细胞分选出 上述动物模型一部分分别在术后第1、3、7天取材，将皮瓣组织于无菌条件下取出并剪碎，用0.2%的胶原酶于37℃振荡消化1h后，用等体积含10%胎牛血清DMEM液中止消化，离心后用2%FBS重悬，用流式细胞仪将DiL标记的阳性细胞与裸鼠自身的阴性细胞分选出。 3、2分选后的细胞提RNA行VEGF、bFGF及HIF-1α的定量PCR分析。 结果：1、大鼠ADSCs贴壁后呈成纤维细胞样形态。第三代ADSCs经成脂、成软骨诱导分化后，染色结果均为阳性。 2、ADSCs治疗组皮瓣成活率显著高于对照组，p0.001，有统计学差异。 3、流式细胞分选结果提示，在细胞治疗后第1、3、7天，植入的细胞数量（带荧光标记的阳性细胞）呈明显下降趋势。 4、定量PCR结果提示：经细胞治疗干预的皮瓣组织，其HIF-1α及其下游分子的表达水平较对照组高，且随时间推移有增加趋势。 结论：促进损伤组织血管化的细胞因子来源于裸鼠自身，而并非植入的ADSCs所分泌。证实了细胞的植入其实是通过上调组织自身的血管化因子水平，来间接促进组织血管新生的。
[Abstract]:Aim: to explore the therapeutic mechanism of adipose stem cell (adipose-derived cells,ADSCs) therapy to promote tissue vascularization and to provide a theoretical basis for clinical transformation of cell therapy. Methods the isolation, culture and identification of wistar rat inguinal fat pad were carried out under aseptic condition, then washed with chloramphenicol, digested in collagenase, centrifuged at low speed, filtered by cell screen, then inoculated into culture dish to obtain primary ADSCs.. The third generation of ADSCs was cultured with cartilage and lipopolipid induction medium. Type 鈪

本文编号：2221045