佐剂性关节炎大鼠脾脏组织GRK2免疫荧光法建立

发布时间：2018-09-06 06:54

【摘要】：建立了适合佐剂性关节炎大鼠脾脏组织G蛋白偶联受体激酶2(GRK2)免疫荧光测定法。考察了免疫荧光测定的4个关键条件:(1)渗透剂Triton X-100的影响;(2)不同抗原修复液:柠檬酸缓冲液和p H 9.0乙二胺四乙酸(EDTA)缓冲液的影响;(3)5%胎牛血清封闭不同时间(20、30、40、50min)的影响;(4)不同一抗浓度(1∶50、1∶100、1∶200、1∶400、1∶500)的影响。实验结果显示,Triton X-100通透增强了抗原的表达;1∶100的一抗浓度对荧光信号强度最合适;封闭50 min能显著去除背景非特异性染色;柠檬酸缓冲液优于p H 9.0 EDTA缓冲液,提高了抗原表达。
[Abstract]:An immunofluorescence assay was developed for the determination of G protein coupled receptor kinase 2 (GRK2) in spleen of adjuvant arthritis rats. Four key conditions for immunofluorescence determination were investigated: (1) the effect of osmotic agent Triton X-100, (2) the effect of different antigen repair solution: citric acid buffer and pH 9.0 ethylenediamine tetraacetic acid (EDTA) buffer, (3) 5% fetal bovine serum blocking for different time (2030 ~ 4050min). (4) the effect of different concentrations (1: 50, 1: 100, 1: 200, 1: 400, 1: 500). The results showed that Triton X-100 permeable enhanced the expression of antigen 1: 100 and the first antibody concentration of 1: 100 was the most suitable for the intensity of fluorescence signal; blocking 50 min could significantly remove background nonspecific staining; citric acid buffer was superior to pH 9.0 EDTA buffer. The antigen expression was improved.
【作者单位】： 安徽医科大学临床药理研究所抗炎免疫药物教育部重点实验室抗炎免疫药物安徽协同创新中心;
【基金】：国家自然科学基金(编号:81330081、81673444、81502123)
【分类号】：R-332

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本文编号：2225590