Grb7蛋白SH2结构域结合新型非磷酸化模序的研究

发布时间：2018-09-11 18:55

【摘要】：Grb7蛋白是一种接头蛋白,该蛋白是Grb7蛋白家族的成员之一,这个蛋白家族包括Grb7, Grb10和Grb14三个成员。现在研究发现,Grb7蛋白在一些恶性肿瘤组织中,尤其是高转移性肿瘤组织中处于高表达状态,比如乳腺癌,食管癌,胃癌等。编码Grb7蛋白的基因位于人染色体17q12-q21,该区域在临床检验中已被证实在某些肿瘤中有明显的扩增,这一基因基础,决定了Grb7蛋白有可能成为临床治疗肿瘤的一个重要靶点。在Grb7蛋白中,一共有三个主要的功能区域,N末端富含脯氨酸,中间序列和Caenorhabditis elegans的Mig-10蛋白有很高的相似性,该结构域在细胞迁移中发挥了重要作用,C末端是一个SH2结构域。SH2结构域在Grb7蛋白参与的细胞信号传导通路中发挥了重要作用。虽然Grb7蛋白SH2结构域主要是以结合磷酸化酪氨酸模序为主,但近年来的研究发现Grb7蛋白SH2结构域也可以结合非磷酸化模序,而且由于非磷酸化肽段较磷酸化肽段在体内更加易稳定存在,所以研究Grb7蛋白SH2结构域结合非磷酸化肽段的特性更有助于研制针对Grb7蛋白高表达的肿瘤治疗的药物。在本文的研究中,我们使用酵母双杂交的方法,在随机多肽文库中筛选到了可结合Grb7蛋白SH2结构域的一系列非磷酸化肽段,这些肽段的共同之处在于,每个肽段序列中均含一个22个氨基酸序列,该序列N末端为GIPT/N/K的保守序列,C末端为G/WD/IP的保守序列,中间为15个随机排列的氨基酸,富含丝氨酸,苏氨酸和脯氨酸,突变实验表明22个氨基酸序列中,两端保守的7个氨基酸对非磷酸化肽段结合Grb7蛋白SH2结构域发挥重要作用,这种新的结合形式在体外免疫共沉淀和活细胞内的荧光能量转移实验已得到证实。
[Abstract]:Grb7 protein is a kind of junction protein, which is a member of Grb7 protein family, which consists of three members: Grb7, Grb10 and Grb14. Now it has been found that Grb7 protein is highly expressed in some malignant tissues, especially in high metastatic tumors, such as breast cancer, esophageal cancer, gastric cancer and so on. The gene encoding Grb7 protein is located on human chromosome 17q12-q21. This region has been confirmed to be significantly amplified in some tumors in clinical laboratory. This gene basis determines that Grb7 protein may become an important target for clinical treatment of tumors. In the Grb7 protein, there are three major functional regions, the N-terminal of which is rich in proline, and the intermediate sequence is highly similar to the Mig-10 protein of Caenorhabditis elegans. This domain plays an important role in cell migration. C terminal is a SH2 domain. SH2 domain plays an important role in the cellular signal transduction pathway in which Grb7 protein is involved. Although the SH2 domain of Grb7 protein is mainly phosphorylated tyrosine motif, it has been found in recent years that the SH2 domain of Grb7 protein can also bind to non-phosphorylated motifs. Since non-phosphorylated peptides are more stable than phosphorylated peptides in vivo, it is more helpful to study the characteristics of SH2 domain binding to non-phosphorylated peptide domain of Grb7 protein and to develop drugs for the treatment of tumor with high expression of Grb7 protein. In our study, we used yeast two-hybrid method to screen a series of non-phosphorylated peptides binding to the SH2 domain of Grb7 protein in a random polypeptide library. Each peptide sequence contained a 22-amino acid sequence. The N-terminal conserved sequence of GIPT/N/K was conserved at the C-terminal of G/WD/IP, with 15 randomly arranged amino acids, rich in serine, threonine and proline. Mutation analysis showed that 7 amino acids conserved at both ends of the 22 amino acid sequences play an important role in the SH2 domain of non-phosphorylated peptide binding to Grb7 protein. This new binding form has been confirmed by in vitro immunoprecipitation and fluorescence energy transfer in living cells.
【学位授予单位】：北京协和医学院
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2011
【分类号】：R363

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本文编号：2237580